中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-6页 |
第一章: 文献综述 | 第6-14页 |
1 马铃薯淀粉生物合成机制 | 第7-12页 |
1.1 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 | 第7-11页 |
1.1.1 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶定位 | 第9页 |
1.1.2 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶调控 | 第9-11页 |
1.1.2.1 转录水平的调控 | 第9页 |
1.1.2.2 环境条件对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的调控 | 第9-10页 |
1.1.2.3 化学物质和生物小分子、大分子物质对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的调控 | 第10-11页 |
1.1.2.4 利用分子生物学方法调控腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性 | 第11页 |
1.2 淀粉合成酶 | 第11-12页 |
1.3 淀粉分支酶 | 第12页 |
1.4 淀粉去分支酶 | 第12页 |
2 反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第12-13页 |
3 马铃薯淀粉合成有关酶的基因克隆 | 第13-14页 |
第二章 AGPasre基因克隆 | 第14-31页 |
1 材料与试剂 | 第14页 |
1.1 材料 | 第14页 |
1.2 菌种及质粒 | 第14页 |
1.3 试剂 | 第14页 |
2 方法 | 第14-23页 |
2.1 马铃薯叶片总RNA的提取 | 第14-15页 |
2.2 PCR 引物设计与合成 | 第15页 |
2.3 AGPase基因的扩增 | 第15-16页 |
2.3.1 cDNA第一链的合成 | 第15-16页 |
2.3.2 AGPase基因PCR扩增 | 第16页 |
2.3.3 PCR产物的凝胶电泳 | 第16页 |
2.4 目的片段的回收和克隆 | 第16-23页 |
2.4.1 目的片段的回收 | 第16-17页 |
2.4.2 重组体的构建及向宿主细胞的导入 | 第17-18页 |
2.4.3 重组体的筛选与鉴定 | 第18-20页 |
2.4.4 重组体DNA测序 | 第20-23页 |
3 结果与分析 | 第23-28页 |
3.1 马铃薯叶片中AGPase的诱导和总RNA的提取 | 第23页 |
3.2 cDNA中目的基因片段的PCR扩增 | 第23-24页 |
3.3 克隆、阳性重组体的筛选 | 第24-25页 |
3.4 核苷酸序列分析 | 第25-28页 |
4 讨论 | 第28-31页 |
4.1 马铃薯RNA提取方法和取材 | 第28-29页 |
4.2 PCR扩增及引物设计中加入酶切位点 | 第29-31页 |
第三章 AGPase基因植物表达载体构建和专化农杆菌 | 第31-39页 |
1 材料与试剂 | 第31页 |
1.1 载体 | 第31页 |
1.2 菌株 | 第31页 |
1.3 试剂 | 第31页 |
2 方法 | 第31-35页 |
2.1 植物表达载体构建 | 第31-32页 |
2.1.1 质粒的提取方法 | 第31页 |
2.1.2 pBI121质粒和pGEMA质粒的酶切和目的片段的回收 | 第31-32页 |
2.1.3 线状载体分子与目的基因DNA分子的连接 | 第32页 |
2.1.4 植物表达载体的酶切鉴定 | 第32页 |
2.2 表达载体专化农杆菌 | 第32-35页 |
2.2.1 农杆菌感受态的制备 | 第32-33页 |
2.2.2 植物表达载体专化农杆菌 | 第33页 |
2.2.3 农杆菌整合外源基因的PCR鉴定 | 第33-35页 |
3 结果与分析 | 第35-36页 |
3.1 AGPase基因表达载体的构建 | 第35-36页 |
3.2 重组子导入农杆菌LB4404 | 第36页 |
3.3 农杆菌工程菌的鉴定 | 第36页 |
4 讨论 | 第36-39页 |
4.1 基因表达载体的构建 | 第36-37页 |
4.2 专化农杆菌及其鉴定 | 第37-39页 |
第四章 结论 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-45页 |
致谢 | 第45页 |