| 缩写词表 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-11页 |
| 英文摘要 | 第11-15页 |
| 文献回顾 | 第15-32页 |
| 1 关节软骨细胞培养和BMP对关节软骨细胞的作用 | 第15-20页 |
| ·关节软骨细胞培养； | 第15-17页 |
| ·BMP家族及对关节软骨细胞作用 | 第17-20页 |
| 2 基因转移技术和核酸疫苗的研究进展 | 第20-27页 |
| ·基因转移技术的研究进展； | 第20-23页 |
| ·核酸疫苗的研究进展 | 第23-27页 |
| 3 基因转移和核酸疫苗在骨科和其它领域的应用 | 第27-32页 |
| ·转基因技术在骨关节病研究中的应用； | 第27-29页 |
| ·转基因技术和核酸疫苗在其它领域的应用 | 第29-32页 |
| 第一部分 培养状态下兔关节软骨细胞生长特性的观察 | 第32-41页 |
| 1 材料和方法 | 第32-35页 |
| ·主要试剂和动物； | 第32页 |
| ·主要仪器； | 第32-33页 |
| ·软骨细胞的消化分离和原代培养； | 第33-34页 |
| ·软骨细胞的传代培养； | 第34页 |
| ·软骨细胞的冻存； | 第34页 |
| ·软骨细胞的生长曲线测定； | 第34页 |
| ·软骨细胞分裂指数测定； | 第34-35页 |
| ·软骨细胞贴壁率 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-38页 |
| ·软骨细胞原代和传代培养情况及其生长曲线； | 第35-36页 |
| ·软骨细胞各代生长曲线的比较； | 第36页 |
| ·软骨细胞对种植密度的依赖性； | 第36-37页 |
| ·软骨细胞分裂指数； | 第37页 |
| ·软骨细胞的贴壁率 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-41页 |
| 第二部分 重组真核表达载体PcDNA3-hBMP3质粒的构建 | 第41-50页 |
| 1 材料和试剂 | 第41-42页 |
| ·细胞系； | 第41页 |
| ·质粒； | 第41页 |
| ·主要试剂； | 第41页 |
| ·主要仪器； | 第41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-46页 |
| ·hBMP3质粒DNA细菌转化实验； | 第42-43页 |
| ·hBMP3质粒DNA小量迅速提取及酶切鉴定； | 第43页 |
| ·hBMP3质粒DNA酶切片断回收； | 第43页 |
| ·质粒DNA含量及纯度的测定； | 第43-44页 |
| ·真核表达载体PcDNA3质粒的转化、扩增、提取、酶切鉴定,片断的回收及其含量和纯度的测定； | 第44页 |
| ·将hBMP3定向克隆至真核表达载体PcDNA3； | 第44页 |
| ·PcDNA3-hBMP3重组质粒的大量制备； | 第44-45页 |
| ·PcDNA3-hBMP3重组质粒DNA纯化； | 第45页 |
| ·PcDNA3-hBMP3重组质粒含量纯度测定 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-47页 |
| ·hBMP3在原质粒和重组PcDNA3-hBMP3质粒中的酶切鉴定； | 第46-47页 |
| ·重组PcDNA3-hBMP3质粒DNA酶切鉴定 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 第三部分 脂质体介导下重组PcDNA3-hBMP3转染软骨细胞条件的探讨 | 第50-60页 |
| 1 材料和试剂 | 第50-51页 |
| ·主要仪器； | 第50页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| ·软骨细胞转染的一般方法和考虑因素； | 第51-53页 |
| ·脂质体介导下PcDNA3-hBMP3转染软骨细胞的相关研究； | 第53页 |
| ·转染后细胞爬片hBMP3的cDNA探针原位杂交方法； | 第53-54页 |
| ·计算机图象分析和统计方法 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-58页 |
| ·转染时机的选择: | 第54-55页 |
| ·G418浓度对软骨细胞的杀伤作用； | 第55-56页 |
| ·细胞种植密度和脂质体浓度对软骨细胞转染效率的影响； | 第56-57页 |
| ·细胞种植密度和PcDNA3-BMP3浓度对软骨细胞转染效率的影响 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第四部分 重组PcDNA3-hBMP3转染对软骨细胞增殖的影响 | 第60-71页 |
| 1 材料和试剂 | 第60-61页 |
| ·主要仪器； | 第60页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-64页 |
| ·软骨细胞转染后mRNA瞬时和稳定表达的检测(斑点杂交)； | 第61-62页 |
| ·软骨细胞转染后hBMP3蛋白表达的检测(蛋白电泳)； | 第62页 |
| ·转染后细胞爬片Ⅱ型胶原cDNA探针原位杂交方法； | 第62-63页 |
| ·软骨细胞流式细胞仪的检测方法； | 第63页 |
| ·软骨细胞DNA和葡萄糖醛酸含量测定； | 第63-64页 |
| ·计算机图象分析和统计方法 | 第64页 |
| 3 结果 | 第64-68页 |
| ·软骨细胞转染结果； | 第65页 |
| ·软骨细胞mRNA瞬时和稳定表达结果； | 第65页 |
| ·软骨细胞hBMP3蛋白表达结果； | 第65-66页 |
| ·软骨细胞流式细胞仪测定结果； | 第66页 |
| ·软骨细胞DNA和葡萄糖醛酸含量测定结果 | 第66-67页 |
| ·软骨细胞流式细胞仪测定结果 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| 照片 | 第71-82页 |
| 小结 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 附录一 在读期间发表的相关论文目录 | 第91-92页 |
| 附录二 在读期间发表的其它论文目录 | 第92-93页 |
| 附录三 在读期间获得奖项及基金 | 第93页 |
