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肺炎链球菌HMG-CoA合成酶和还原酶基因克隆表达及功能研究

摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 前言第12-37页
   ·肺炎链球菌概述第12-19页
     ·肺炎链球菌致病机理第13页
     ·肺炎链球菌耐药性研究进展第13-19页
   ·肺炎链球菌HMGS和HMGR概述第19-26页
     ·肺炎链球菌HMGS和HMGR第19-23页
     ·甲羟戊酸途径第23-25页
     ·HMGS和HMGR作用机理第25-26页
   ·HMG-CoA合成酶和还原酶抑制剂第26-30页
     ·HMG-CoA合成酶抑制剂研究进展第26-27页
     ·HMG-CoA还原酶抑制剂研究进展第27-30页
   ·现代抗生素药物研究开发的特点与趋势第30-35页
     ·抗生素药物的现状调查第30-32页
     ·重要性及存在问题第32-33页
     ·现代抗生素药物开发趋势第33-35页
   ·立题依据及研究意义第35-37页
第二章 重组肺炎链球菌HMGS克隆表达与动力学研究第37-56页
   ·引言第37-38页
   ·实验材料第38-40页
     ·菌株和质粒第38页
     ·生化试剂及抗生素第38页
     ·工具酶第38页
     ·常用储存液第38页
     ·常用缓冲液第38-39页
     ·培养基第39页
     ·Ni-NTA亲和层析用缓冲液第39页
     ·定点突变试剂第39-40页
   ·实验方法第40-44页
     ·肺炎链球菌培养第40页
     ·肺炎链球菌基因组DNA的提取第40页
     ·肺炎链球菌HMGS基因特异性引物的设计第40页
     ·PCR扩增第40-41页
     ·重组载体构建与鉴定第41页
     ·重组蛋白的原核表达与SDS-PAGE分析第41-42页
     ·定点突变PCR与检测第42-43页
     ·转化感受态细胞第43页
     ·重组肺炎链球菌HMGS表达条件的优化第43页
     ·Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质第43-44页
     ·酶活性测定第44页
     ·动力学分析第44页
   ·结果与分析第44-55页
     ·肺炎链球菌基因HMGS基因克隆及原核表达第44-47页
     ·重组表达质粒pET-HMGS的定点突变及鉴定第47-50页
     ·重组肺炎链球菌HMGSm表达条件的优化第50-51页
     ·重组HMGSm蛋白的分离纯化第51-52页
     ·重组肺炎链球菌HMGS活力测定及动力学研究第52-55页
   ·讨论第55-56页
第三章 肺炎链球菌HMGR基因克隆表达、多抗制备及特性研究第56-75页
   ·引言第56-57页
   ·实验材料第57-58页
     ·菌株和质粒第57页
     ·生化试剂及抗生素第57页
     ·工具酶第57页
     ·常用培养基和缓冲液第57页
     ·Ni-NTA亲和层析用缓冲液第57页
     ·ELISA用缓冲液第57-58页
     ·Western blot用缓冲液第58页
   ·实验方法第58-61页
     ·肺炎链球菌HMGR基因特异性引物的设计及PCR扩增第58页
     ·克隆载体pMD-HMGR的构建第58-59页
     ·重组表达质粒pET-HMGR的构建及原核表达第59页
     ·Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质第59页
     ·多克隆抗体的制备及效价测定第59-60页
     ·Western blot分析第60页
     ·酶活性检测方法及动力学分析第60页
     ·HMGS和HMGR功能研究第60-61页
     ·统计学分析第61页
   ·结果与分析第61-73页
     ·肺炎链球菌HMGR基因克隆及原核表达第61-65页
     ·重组肺炎链球菌HMGR的分离纯化第65-66页
     ·多克隆抗体的制备及免疫学活性鉴定第66-67页
     ·重组肺炎链球菌HMGR活力测定及动力学研究第67-70页
     ·HMGS和HMGR功能研究第70-73页
   ·讨论第73-75页
第四章 HMGS和HMGR同源模建及在抗生素药物筛选中的应用第75-93页
   ·引言第75-76页
   ·实验材料第76页
     ·药物与试剂第76页
     ·HMGR筛药反应体系第76页
   ·实验方法第76-79页
     ·同源模建第76-78页
     ·分子动力学优化第78-79页
     ·竞争性抑制剂筛选方法的建立第79页
   ·实验结果第79-92页
     ·肺炎链球菌HMGS同源模建第79-81页
     ·肺炎链球菌HMGR同源模建及分子动力学模拟第81-84页
     ·肺炎链球菌重组HMGR在新抗生素药物筛选中的应用第84-92页
   ·讨论第92-93页
全文总结第93-95页
参考文献第95-105页
博士期间发表的论文第105-106页
致谢第106页

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