摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-12页 |
第一章 前言 | 第12-37页 |
·肺炎链球菌概述 | 第12-19页 |
·肺炎链球菌致病机理 | 第13页 |
·肺炎链球菌耐药性研究进展 | 第13-19页 |
·肺炎链球菌HMGS和HMGR概述 | 第19-26页 |
·肺炎链球菌HMGS和HMGR | 第19-23页 |
·甲羟戊酸途径 | 第23-25页 |
·HMGS和HMGR作用机理 | 第25-26页 |
·HMG-CoA合成酶和还原酶抑制剂 | 第26-30页 |
·HMG-CoA合成酶抑制剂研究进展 | 第26-27页 |
·HMG-CoA还原酶抑制剂研究进展 | 第27-30页 |
·现代抗生素药物研究开发的特点与趋势 | 第30-35页 |
·抗生素药物的现状调查 | 第30-32页 |
·重要性及存在问题 | 第32-33页 |
·现代抗生素药物开发趋势 | 第33-35页 |
·立题依据及研究意义 | 第35-37页 |
第二章 重组肺炎链球菌HMGS克隆表达与动力学研究 | 第37-56页 |
·引言 | 第37-38页 |
·实验材料 | 第38-40页 |
·菌株和质粒 | 第38页 |
·生化试剂及抗生素 | 第38页 |
·工具酶 | 第38页 |
·常用储存液 | 第38页 |
·常用缓冲液 | 第38-39页 |
·培养基 | 第39页 |
·Ni-NTA亲和层析用缓冲液 | 第39页 |
·定点突变试剂 | 第39-40页 |
·实验方法 | 第40-44页 |
·肺炎链球菌培养 | 第40页 |
·肺炎链球菌基因组DNA的提取 | 第40页 |
·肺炎链球菌HMGS基因特异性引物的设计 | 第40页 |
·PCR扩增 | 第40-41页 |
·重组载体构建与鉴定 | 第41页 |
·重组蛋白的原核表达与SDS-PAGE分析 | 第41-42页 |
·定点突变PCR与检测 | 第42-43页 |
·转化感受态细胞 | 第43页 |
·重组肺炎链球菌HMGS表达条件的优化 | 第43页 |
·Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质 | 第43-44页 |
·酶活性测定 | 第44页 |
·动力学分析 | 第44页 |
·结果与分析 | 第44-55页 |
·肺炎链球菌基因HMGS基因克隆及原核表达 | 第44-47页 |
·重组表达质粒pET-HMGS的定点突变及鉴定 | 第47-50页 |
·重组肺炎链球菌HMGSm表达条件的优化 | 第50-51页 |
·重组HMGSm蛋白的分离纯化 | 第51-52页 |
·重组肺炎链球菌HMGS活力测定及动力学研究 | 第52-55页 |
·讨论 | 第55-56页 |
第三章 肺炎链球菌HMGR基因克隆表达、多抗制备及特性研究 | 第56-75页 |
·引言 | 第56-57页 |
·实验材料 | 第57-58页 |
·菌株和质粒 | 第57页 |
·生化试剂及抗生素 | 第57页 |
·工具酶 | 第57页 |
·常用培养基和缓冲液 | 第57页 |
·Ni-NTA亲和层析用缓冲液 | 第57页 |
·ELISA用缓冲液 | 第57-58页 |
·Western blot用缓冲液 | 第58页 |
·实验方法 | 第58-61页 |
·肺炎链球菌HMGR基因特异性引物的设计及PCR扩增 | 第58页 |
·克隆载体pMD-HMGR的构建 | 第58-59页 |
·重组表达质粒pET-HMGR的构建及原核表达 | 第59页 |
·Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质 | 第59页 |
·多克隆抗体的制备及效价测定 | 第59-60页 |
·Western blot分析 | 第60页 |
·酶活性检测方法及动力学分析 | 第60页 |
·HMGS和HMGR功能研究 | 第60-61页 |
·统计学分析 | 第61页 |
·结果与分析 | 第61-73页 |
·肺炎链球菌HMGR基因克隆及原核表达 | 第61-65页 |
·重组肺炎链球菌HMGR的分离纯化 | 第65-66页 |
·多克隆抗体的制备及免疫学活性鉴定 | 第66-67页 |
·重组肺炎链球菌HMGR活力测定及动力学研究 | 第67-70页 |
·HMGS和HMGR功能研究 | 第70-73页 |
·讨论 | 第73-75页 |
第四章 HMGS和HMGR同源模建及在抗生素药物筛选中的应用 | 第75-93页 |
·引言 | 第75-76页 |
·实验材料 | 第76页 |
·药物与试剂 | 第76页 |
·HMGR筛药反应体系 | 第76页 |
·实验方法 | 第76-79页 |
·同源模建 | 第76-78页 |
·分子动力学优化 | 第78-79页 |
·竞争性抑制剂筛选方法的建立 | 第79页 |
·实验结果 | 第79-92页 |
·肺炎链球菌HMGS同源模建 | 第79-81页 |
·肺炎链球菌HMGR同源模建及分子动力学模拟 | 第81-84页 |
·肺炎链球菌重组HMGR在新抗生素药物筛选中的应用 | 第84-92页 |
·讨论 | 第92-93页 |
全文总结 | 第93-95页 |
参考文献 | 第95-105页 |
博士期间发表的论文 | 第105-106页 |
致谢 | 第106页 |