| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-27页 |
| ·A.FERROOXIDANS铁硫氧化系统介绍 | 第10-17页 |
| ·A.ferrooxidans铁氧化系统介绍 | 第10-15页 |
| ·A.ferrooxidans硫氧化系统的介绍 | 第15-17页 |
| ·高氧化还原电位铁硫蛋白(HIPIP) | 第17-20页 |
| ·HiPIP的介绍 | 第17-18页 |
| ·HiPIP晶体结构 | 第18-19页 |
| ·亚铁氧化酶(Iron oxidase)介绍 | 第19-20页 |
| ·铁硫簇组装机理 | 第20-26页 |
| ·铁硫簇组装蛋白IscA,IscU,IscS,IscR | 第21-23页 |
| (一) IscA的介绍(Iron Sulfur Cluster Assembly protein A) | 第21-22页 |
| (二) 铁硫簇组装蛋白IscU,IscS,IscR | 第22-23页 |
| ·HiPIP铁硫簇的体外组装 | 第23-24页 |
| ·铁硫簇组装机理 | 第24-26页 |
| ·课题的研究目的与研究内容 | 第26-27页 |
| ·依据和目的 | 第26页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第26页 |
| ·论文课题受资助情况 | 第26-27页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第27-40页 |
| ·实验材料 | 第27-30页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·A.f基因组抽提试剂 | 第28页 |
| ·质粒提取试剂 | 第28页 |
| ·不连续体系SDS-PAGE电泳 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE胶保存试剂及装置 | 第29页 |
| ·蛋白亲和纯化试剂 | 第29-30页 |
| ·试验仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-36页 |
| ·PCR扩增 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增产物的鉴定 | 第32页 |
| ·酶切PCR产物及载体pLM 1 | 第32页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第32页 |
| ·克隆的转化 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第33页 |
| ·蛋白质的表达转化 | 第33-34页 |
| ·蛋白质的表达最佳条件的确定 | 第34页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第34-35页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第35-36页 |
| ·定点突变 | 第36-39页 |
| ·突变引物的设计 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第38页 |
| ·突变蛋白质的表达及纯化 | 第38-39页 |
| ·测试分析方法 | 第39-40页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第39页 |
| ·紫外分光光度计(UV Scanning) | 第39页 |
| ·电子顺磁共振(EPR or ESR) | 第39页 |
| ·基质辅助激光解吸串联分行时间质谱(MALDI-TOF) | 第39-40页 |
| 第三章 高氧化还原电位铁硫蛋白的表达、纯化及CYS25,CYS28,CYS37,CYS50的定点突变 | 第40-49页 |
| ·高氧化还原点位铁硫蛋白的克隆 | 第40-41页 |
| ·高氧化还原电位铁硫蛋白基因的克隆 | 第40页 |
| ·连接反应及阳性克隆的筛选 | 第40-41页 |
| ·高氧化还原电位铁硫蛋白的表达 | 第41-46页 |
| ·高氧化还原电位铁硫蛋白表达条件的确定 | 第41-42页 |
| ·高氧化还原电位铁硫蛋白大规模的表达 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE分析高氧化还原电位铁硫蛋白 | 第42-43页 |
| ·UV/Vis分析高氧化还原电位铁硫蛋白 | 第43-44页 |
| ·电子顺磁共振波谱(EPR)分析HiPIP蛋白 | 第44页 |
| ·分子模拟高氧化还原电位铁硫蛋白 | 第44-46页 |
| ·高氧化还原电位铁硫蛋白CYS25,CYS28,CYS37和CYS50的定点突变 | 第46-47页 |
| ·氨基酸定点突变 | 第46页 |
| ·突变蛋白质的表达 | 第46页 |
| ·UV/Vis分析突变蛋白 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第四章 铁硫簇体外组装机理的研究 | 第49-55页 |
| ·APO-形式蛋白质的准备 | 第49-50页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·蛋白质去铁硫簇 | 第49-50页 |
| ·铁硫簇的组装 | 第50页 |
| ·UV/VIS测定APO-及HOLO-形式蛋白性质 | 第50-52页 |
| ·MALDI-MS分析铁硫簇的组装结果 | 第52-53页 |
| ·铁硫簇的组装流程模型 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 第五章 IRON SULFUR CLUSTER ASSEMBLY A(ISCA)的定点突变 | 第55-60页 |
| ·ISCA蛋白分子结构模拟图 | 第55-57页 |
| ·ISCA蛋白的定点突变 | 第57-59页 |
| ·IscA蛋白的定点突变 | 第57页 |
| ·突变蛋白质的表达及测定 | 第57页 |
| ·突变蛋白质的SDS-PAGE检测 | 第57-58页 |
| ·UV/Vis分析突变蛋白 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第六章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 研究成果 | 第71页 |
