| 缩略语表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-19页 |
| 1.DARC和Duffy抗原的发现历史及命名 | 第13-14页 |
| 2.研究背景和假设的提出 | 第14-15页 |
| 3.研究途径和方法 | 第15页 |
| 4.研究意义 | 第15-17页 |
| 前言参考文献 | 第17-19页 |
| 第一部分、乳癌细胞系的DARC表达的调节机制研究 | 第19-62页 |
| 实验材料与方法 | 第19-43页 |
| 一.实验材料 | 第19-24页 |
| 1.细胞及培养 | 第19页 |
| 2.主要试剂 | 第19-23页 |
| ·处理因素相关试剂 | 第19页 |
| ·Real-Time PCR相关试剂 | 第19-20页 |
| ·Western-Blot主要试剂 | 第20页 |
| ·Western-Blot其它相关试剂 | 第20-22页 |
| ·Transwell相关试剂 | 第22页 |
| ·ELISA相关试剂 | 第22-23页 |
| 3.主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 二.方法 | 第24-43页 |
| 1.细胞培养 | 第24页 |
| 2.Real-Time PCR | 第24-30页 |
| ·总RNA抽提 | 第24-25页 |
| ·逆转录 | 第25-26页 |
| ·Real-Time PCR | 第26-28页 |
| ·Real-Time PCR的质量控制 | 第28-30页 |
| ·Real-Time PCR实验处理因素 | 第30页 |
| 3.Western Blot | 第30-39页 |
| ·细胞裂解液的收集 | 第31页 |
| ·蛋白定量及浓度的调节 | 第31-33页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第33-34页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第34页 |
| ·转膜 | 第34页 |
| ·丽春红染色 | 第34-35页 |
| ·封闭 | 第35页 |
| ·免疫检测 | 第35-36页 |
| ·ECL反应及曝光 | 第36页 |
| ·洗脱抗体后再次行Western Blot检测 | 第36页 |
| ·Western Blot实验的图像采集和分析 | 第36-37页 |
| ·Western Blot实验的质量控制 | 第37页 |
| ·Western Blot实验处理因素 | 第37-39页 |
| 4.Transwell | 第39-41页 |
| ·细胞上调DARC后细胞对于CCL2趋化运动的改变 | 第41页 |
| ·细胞上调DARC后对于细胞侵袭性的影响 | 第41页 |
| 5.ELISA | 第41-43页 |
| ·ELISA基本原理 | 第41-42页 |
| ·ELISA操作步骤 | 第42页 |
| ·ELISA注意事项 | 第42-43页 |
| 6.统计方法 | 第43页 |
| 结果 | 第43-57页 |
| 1.TNF-α和IL-1β对于DARC调节作用较明显,IFN-γ和IL-8对于DARC表达的影响较弱 | 第43-50页 |
| 2.应用TNF-α抗体后,TNF-α上调DARC的作用减弱 | 第50-51页 |
| 3.AEA(NF-κB阻滞剂)25μM的终浓度作用后,TNF-α上调DARC表达作用降低 | 第51-54页 |
| 4.乳腺癌细胞系MDA-MB-231自身分泌的TNF-α对DARC表达没有显著影响 | 第54-55页 |
| 5.TNF-α上调乳腺癌细胞系的DARC表达后,提高了细胞对于CCL2的趋化运动,同时降低细胞的侵袭运动能力 | 第55-56页 |
| 6.TNF-α上调乳腺癌细胞系的DARC表达后,提高了细胞对于CXCL8、CCL2的清除能力 | 第56-57页 |
| 讨论 | 第57-62页 |
| 1.DARC的结构、功能、表达、以及与肿瘤的关系 | 第57-58页 |
| 2.本实验选择MDA-MB-231细胞系作为研究对象的原因 | 第58页 |
| 3.不同致炎性细胞因子对于DARC的调节作用不同 | 第58-59页 |
| 4.TNF-α抗体对TNF-α引起的DARC表达改变的影响 | 第59页 |
| 5.TNF-α对DARC的调节可能通过NF-κB起作用 | 第59页 |
| 6.内源性TNF-α对DARC表达的调节并不显著 | 第59-60页 |
| 7.DARC上调后,提高细胞对于CXCL8、CCL2的趋化运动和提高细胞清除趋化因子CXCL8、CCL2的能力,同时降低细胞的侵袭运动能力 | 第60-61页 |
| 8.对于DARC的调节机制研究,需要进一步考虑的问题 | 第61-62页 |
| 第二部分 患者的Duffy血型与病理关系的研究 | 第62-74页 |
| 材料和方法 | 第62-65页 |
| 一.材料 | 第62页 |
| 1.血液样本准备 | 第62页 |
| 2.主要试剂 | 第62页 |
| 二.方法 | 第62-65页 |
| 1.测定Duffy血型的原理 | 第62-63页 |
| ·～5%的红细胞悬液制作 | 第63页 |
| 3.非直接抗人球蛋白法检查Duffy血型的步骤及说明 | 第63-64页 |
| 4.乳腺疾病患者临床资料的收集整理及统计排除的说明 | 第64页 |
| 5.病理诊断方法 | 第64-65页 |
| 6.统计方法 | 第65页 |
| 结果 | 第65-68页 |
| 1.患者的病理诊断 | 第65-66页 |
| 2.乳腺疾病患者和乳腺癌患者的Duffy血型的表型分布 | 第66-67页 |
| 3.患者Duffy血型表型分布与乳腺疾病的良恶性、以及其它的临床病理参数的关系 | 第67页 |
| 4.表型Fya-的患者比Fya+的患者有更高的腋淋巴结转移率 | 第67-68页 |
| 讨论 | 第68-74页 |
| 1.DARC对于乳腺癌是一个负性调控因子 | 第69-70页 |
| 2.DARC在Fya+和Fya-表型的个体的红细胞表面的分布数目是不同的,其结合配体的能力也不同 | 第70页 |
| 3.为什么不同Duffy表型的个体有不同的腋淋巴结转移状况以及为什么Fya-个体比Fya+个体更易发生腋淋巴结转移? | 第70-74页 |
| 结语 | 第74页 |
| 正文的参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 综述:人乳腺癌的动物模型 | 第80-90页 |
| 综述的参考文献 | 第85-90页 |
| 研究生阶段发表论文与参加会议情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
