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拟南芥SOS信号转导途径基因对小麦的转化

中文摘要第1-9页
Abstract第9-12页
符号说明第12-13页
第一部分 文献综述第13-31页
 一 小麦遗传转化研究进展第13-19页
   ·小麦基因转化方法第13-16页
     ·PEG介导法第13页
     ·激光微束法第13-14页
     ·电击法第14页
     ·基因枪法第14页
     ·花粉管通道法第14-15页
     ·农杆菌介导法第15-16页
   ·转基因阳性小麦的筛选和检测方法第16-17页
   ·外源基因的表达分析方法第17-19页
     ·RT-PCR分析第18页
     ·Northern blotting分析第18页
     ·表达蛋白分析第18-19页
 二 植物盐害和耐盐机理研究进展第19-23页
   ·植物盐害机理第19-21页
     ·渗透胁迫第19-20页
     ·离子胁迫第20页
     ·盐分积累第20页
     ·氧化胁迫第20-21页
   ·植物耐盐机理第21-23页
     ·离子平衡的重建第21-22页
     ·渗透平衡调节第22-23页
     ·活性氧(ROS)在细胞内的清除机制第23页
 三 植物盐胁迫应答的分子机制研究进展第23-31页
   ·植物盐胁迫相关的信号转导途径第23-28页
     ·SOS信号途径第23-26页
     ·MAPK渗透/氧化胁迫信号转导途径第26-27页
     ·ABA相关的信号转导途径第27-28页
   ·植物Na~+/H~+逆向转运蛋白研究第28-31页
     ·质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白第28-29页
     ·液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白第29-31页
第二部分 材料和方法第31-42页
 一 实验材料及转化所用的菌株,目的基因和质粒载体结构第31-32页
   ·实验材料第31页
   ·转化所用的菌株,目的基因和质粒载体结构第31-32页
 二 农杆菌转化第32页
   ·菌液的制各第32页
   ·小麦生长点转化第32页
 三 转基因植株的筛选及鉴定第32-41页
   ·转基因植株的筛选第32页
   ·PCR鉴定第32-34页
     ·DNA的提取第32-33页
     ·PCR引物第33页
     ·扩增体系第33-34页
     ·扩增程序第34页
     ·电泳第34页
   ·Southern杂交鉴定第34-39页
     ·质粒酶切及探针片段的回收第34-35页
     ·DNA提取第35页
     ·基因组DNA的酶切和电泳第35页
     ·转膜第35-36页
     ·探针标记第36-37页
     ·杂交及检测第37-39页
   ·RT-PCR分析第39-41页
     ·Trizol法提取叶片总RNA第39页
     ·总RNA的纯化第39-40页
     ·RT-PCR的体系和程序第40-41页
 四 转基因小麦后代遗传与生化分析第41-42页
   ·T2代遗传分析第41页
   ·后代种子盐胁迫下萌发率分析第41页
   ·后代盐胁迫下生长量分析第41页
   ·后代盐胁迫下Na~+,K~+分析第41页
   ·后代盐胁迫下MDA分析第41页
   ·后代盐胁迫下过氧化氢酶分析第41-42页
第三部分 结果与分析第42-56页
 一 转基因植株PCR鉴定和转化频率第42-46页
   ·转化植株相应抗生素或除草剂的筛选第42-43页
   ·PCR分析结果第43-44页
   ·转化频率分析结果第44-46页
 二 转基因植株的Southern杂交结果分析第46-47页
 三 转基因植株的T2代遗传分析第47页
 四 转基因植株的RT-PCR分析第47-50页
   ·总RNA提取结果第47-48页
   ·SOS基因在转基因植株中的表达第48页
   ·SOS1基因在转基因植株叶、根中的表达分析第48-49页
   ·小麦中的SOS1同源基因在不同的SOS转化植株中的表达分析第49-50页
 五 转基因植株后代耐盐性分析结果第50-54页
   ·转基因后代的萌发率分析第50页
   ·转基因后代的生长量分析结果第50-52页
   ·转基因后代的Na~+,K~+含量分析结果第52-53页
   ·转基因后代的MDA分析结果第53页
   ·转基因后代的过氧化氢酶分析结果第53-54页
 六 转基因后代的田间释放第54-56页
第四部分 讨论第56-60页
 一 小麦基因转方法第56页
 二 转基因小麦的筛选和检测第56-57页
 三 SOS信号途径在小麦中的作用第57-58页
 四 小麦质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白第58-60页
参考文献第60-66页
致谢第66-67页
学位论文评阅及答辩情况表第67页

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