| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一章：文献综述 | 第16-46页 |
| 第一节：猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2及其相关疫苗研究进展 | 第16-28页 |
| 一、猪瘟病毒的分子结构 | 第16-22页 |
| ·猪瘟病毒的基因结构 | 第16-17页 |
| ·猪瘟病毒的编码蛋白及其功能 | 第17-21页 |
| ·CSFV的机体免疫防御机制 | 第21-22页 |
| 二、猪瘟病毒的检测 | 第22-24页 |
| ·猪瘟病毒的血清学检测方法 | 第22-23页 |
| ·猪瘟病毒的分子检测方法 | 第23-24页 |
| 三、猪瘟疫苗的研究进展 | 第24-28页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第25-26页 |
| ·病毒活载体疫苗 | 第26页 |
| ·DNA疫苗 | 第26-27页 |
| ·多肽疫苗 | 第27页 |
| ·猪瘟病毒标记疫苗 | 第27-28页 |
| 第二节：大肠杆菌肠毒素B亚单位（LTB）研究进展 | 第28-31页 |
| 第三节：毕赤酵母表达系统研究进展 | 第31-46页 |
| 一、生物学特性 | 第31-32页 |
| 二、遗传征学特 | 第32-33页 |
| 三、外源蛋白的表达 | 第33-39页 |
| ·表达载体 | 第33-34页 |
| ·载体的整合 | 第34-35页 |
| ·常见表达菌株 | 第35-36页 |
| ·胞内表达与分泌表达 | 第36页 |
| ·外源蛋白的糖基化 | 第36-37页 |
| ·外源基因表达影响因素 | 第37-39页 |
| 四、毕赤酵母的高密度发酵 | 第39-46页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·温度 | 第40页 |
| ·PH值 | 第40-41页 |
| ·溶解氧 | 第41-42页 |
| ·甲醇的流加方式 | 第42-44页 |
| ·防止外源蛋白的水解 | 第44-46页 |
| 第二章：新型猪瘟黏膜疫苗的研制 | 第46-92页 |
| 第一节： E2抗原决定簇与LTB基因的克隆及在酵母系统中的分泌表达 | 第46-62页 |
| 一、材料和方法 | 第47-53页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-53页 |
| 二、实验结果 | 第53-59页 |
| ·Ppicz aA E2-LTB 酶切鉴定 | 第53页 |
| ·序列分析 | 第53-56页 |
| ·重组子的筛选 | 第56页 |
| ·SDS－PAGE 分析 | 第56-57页 |
| ·Western blot检测 | 第57-58页 |
| ·神经节苷脂受体ELISA | 第58-59页 |
| 三、讨论 | 第59-62页 |
| 第二节 毕赤酵母表达E2-LTB 融合蛋白条件优化及纯化 | 第62-79页 |
| 一、实验材料 | 第62-63页 |
| ·菌株 | 第62-63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| 二、实验方法 | 第63-68页 |
| ·不同pH 值对工程菌生长和外源蛋白表达的影响 | 第63-64页 |
| ·不同诱导时机对外源蛋白表达的影响 | 第64-65页 |
| ·不同诱导强度对外源蛋白表达的影响 | 第65页 |
| ·不同诱导时间对外源蛋白表达的影响 | 第65-66页 |
| ·工程菌的高密度发酵 | 第66页 |
| ·E2 蛋白分离纯化 | 第66-67页 |
| ·蛋白含量和纯度鉴定 | 第67-68页 |
| 三、实验结果 | 第68-75页 |
| ·摇瓶培养中对E2-LTB-酵母工程菌生长和表达条件优化 | 第68-71页 |
| ·高密度发酵 | 第71-72页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第72-75页 |
| 四、讨论 | 第75-79页 |
| 第三节 新型猪瘟黏膜疫苗对小鼠的免疫效力分析及兔体免疫保护研究 | 第79-92页 |
| 一、 材料和方法 | 第80-82页 |
| ·试验动物 | 第80页 |
| ·粘膜疫苗 | 第80-81页 |
| ·动物免疫 | 第81页 |
| ·小鼠样品采集 | 第81页 |
| ·小鼠抗体检测 | 第81页 |
| ·小鼠细胞因子检测 | 第81-82页 |
| ·兔体免疫攻毒保护试验 | 第82页 |
| 二、 实验结果 | 第82-89页 |
| ·血清、鼻冲洗物和肺冲洗物中的IgG 抗体 | 第82-84页 |
| ·血清、鼻冲洗物和肺冲洗物中的IgA 抗体 | 第84-86页 |
| ·E2-LTB 诱导的细胞因子反应 | 第86-88页 |
| ·兔体免疫攻毒保护试验结果 | 第88-89页 |
| 三、讨论 | 第89-92页 |
| 第三章 猪瘟抗体监测ELISA 试剂盒的研制 | 第92-108页 |
| 一、材料和方法 | 第93-96页 |
| ·材料 | 第93页 |
| ·方法 | 第93-96页 |
| 二结果 | 第96-105页 |
| ·目的蛋白浓度的确定 | 第96页 |
| ·ELISA 试剂盒组合条件的优化 | 第96-101页 |
| ·间接ELISA 方法阴阳性值的确定 | 第101-102页 |
| ·与IDEXX 公司试剂盒的比较（表5） | 第102-103页 |
| ·试剂盒的重复性试验 | 第103-104页 |
| ·试剂盒特异性和敏感性试验 | 第104页 |
| ·试剂盒的保存及稳定性试验 | 第104-105页 |
| 三、讨论 | 第105-108页 |
| 参考文献 | 第108-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
