| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一部分 绪论 | 第8-29页 |
| ·蛋白磷酸酶 | 第8-23页 |
| ·蛋白磷酸酶PP1的结构和功能 | 第8-11页 |
| ·蛋白磷酸酶PP2A的结构和功能 | 第11-15页 |
| ·蛋白磷酸酶PP2B的结构和功能 | 第15-18页 |
| ·蛋白磷酸酶2C的结构和功能 | 第18-23页 |
| ·原癌基因Wip1 | 第23-28页 |
| ·立题依据 | 第28-29页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第29-46页 |
| ·实验材料 | 第29-34页 |
| ·细菌菌株与质粒载体 | 第29页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第29页 |
| ·实验仪器 | 第29-31页 |
| ·主要溶液 | 第31-34页 |
| ·实验方法 | 第34-46页 |
| ·PCR技术扩增wip1与wip1-D314A基因 | 第34-35页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第35-37页 |
| ·回收产物与pGEM-T载体连接 | 第37页 |
| ·制备感受态细胞(CaCl_2法) | 第37-38页 |
| ·重组质粒的导入 | 第38页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第38-40页 |
| ·表达载体构建 | 第40页 |
| ·基因的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的亲和层析纯化 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第41-43页 |
| ·蛋质溶液的透析 | 第43页 |
| ·蛋白质溶液的浓缩 | 第43页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第43-44页 |
| ·结合ATP测定 | 第44页 |
| ·圆二色谱仪测定蛋白质二级结构 | 第44-45页 |
| ·圆二色谱仪测定蛋白质二级结构 | 第45-46页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第46-53页 |
| ·wip1与wip1-D314A基因原核克隆载体和表达载体的构建 | 第46-50页 |
| ·PCR扩增wip与wip1-D314A1基因 | 第46页 |
| ·目的基因片段wip1和和wip1-D314A的胶纯化回收 | 第46-47页 |
| ·TA克隆、转化与蓝白筛选 | 第47-48页 |
| ·克隆载体双酶切 | 第48页 |
| ·基因序列测定 | 第48-49页 |
| ·表达载体构建 | 第49-50页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第50-51页 |
| ·wip1结构和功能分析 | 第51-53页 |
| ·ATP与Wip1的结合能力 | 第51页 |
| ·预测Wip1和Wip1-D314A的二级结构 | 第51页 |
| ·圆二色谱测定Wip1和Wip1-D314A的二级结构 | 第51-53页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第53-56页 |
| ·实验讨论 | 第53-54页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第53页 |
| ·蛋白结构功能分析 | 第53-54页 |
| ·实验中的问题 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
