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苎麻抗虫基因遗传转化研究

摘要第1-7页
Abstract第7-16页
第一章 绪论第16-34页
 1 植物基因工程第16-25页
   ·植物基因工程研究进展及其应用第16-17页
     ·抗虫基因工程第16页
     ·抗病基因工程第16页
     ·抗除草剂基因工程第16页
     ·品质改良基因工程第16-17页
     ·其他方面第17页
   ·植物抗虫基因工程研究进展第17-21页
     ·Bt 基因及其转 Bt 基因植物的研究第17-19页
     ·蛋白酶抑制剂基因第19页
     ·其他抗虫基因第19-21页
     ·存在的问题第21页
   ·遗传转化方法第21-24页
     ·农杆菌介导的基因转移第22页
     ·外源 DNA 直接导入第22-23页
     ·种质系统的基因转移第23-24页
   ·苎麻功能基因研究进展第24-25页
 2 苎麻组织培养第25-30页
   ·苎麻组织培养研究进展第25-28页
     ·茎尖培养第26页
     ·(腋芽)快速繁殖第26-27页
     ·子叶、下胚轴、茎段和叶等器官的培养第27页
     ·苎麻体细胞胚胎发生第27页
     ·苎麻原生质体培养第27-28页
     ·苎麻花药培养第28页
     ·苎麻体细胞无性系变异第28页
   ·影响苎麻器官发生和植株再生的因素第28-30页
     ·基因型第28页
     ·外植体第28-29页
     ·培养基第29页
     ·激素第29页
     ·其他因素第29-30页
 3 苎麻遗传转化研究进展和存在问题第30-32页
   ·遗传转化研究进展第30页
   ·苎麻遗传转化存在的主要问题及解决办法第30-31页
   ·展望第31-32页
 4 本研究的目的与意义第32-34页
第二章 高频再生体系的建立第34-48页
 1 材料与方法第34-37页
   ·材料与试剂第34页
   ·方法第34-37页
     ·种子表面消毒第34页
     ·外植体的准备第34-35页
     ·培养基配制与培养条件第35页
     ·下胚轴直接再生体系的建立第35-36页
     ·下胚轴愈伤组织诱导不定芽第36页
     ·不同品种子叶和下胚轴诱导不定芽频率的比较第36页
     ·丛生芽的植株再生第36页
     ·不定芽的生根培养和再生苗的驯化第36页
     ·统计分析第36-37页
 2 结果与分析第37-46页
   ·升汞处理时间的对种子表面消毒效果的影响第37-38页
   ·不同浓度 BA 和 TDZ 组合对下胚轴直接再生体系的影响第38-40页
   ·不同浓度 TDZ 与 IAA 和GA3 和配合使用对诱导不定芽的影响.第40-41页
   ·不同品种子叶和下胚轴诱导不定芽频率的比较第41-42页
   ·子叶和下胚轴愈伤组织及不定芽诱导的细胞学观察第42-43页
   ·丛生芽的植株再生第43-44页
   ·不同浓度NAA 对再生苗生根的影响第44-45页
   ·不定芽的生根培养和再生苗的驯化第45-46页
 3 讨论第46-48页
   ·激素及配比对苎麻下胚轴再生体系建立的影响第46页
   ·高频再生体系的建立第46-48页
第三章 农杆菌介导遗传转化条件的优化及双价转基因抗虫麻的获得第48-72页
 1 材料与方法第48-58页
   ·材料第48-50页
   ·方法第50-58页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第50页
     ·质粒 DNA 转化大肠杆菌第50-51页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第51页
     ·质粒 DNA 转化农杆菌第51页
     ·农杆菌介导外植体转化程序第51-52页
     ·影响转化因素的优化第52页
     ·转基因植株的 PCR 检测第52-53页
     ·RT-PCR第53-55页
     ·GUS 组织染色第55页
     ·苎麻大量基因组DNA 的提取第55-56页
     ·Southern 杂交第56-57页
     ·统计分析的计算公式第57-58页
 2 结果与分析第58-69页
   ·不同浓度头孢霉素对下胚轴再生的影响第58页
   ·Kan 使用浓度对下胚轴不定芽再生的影响第58-59页
   ·Kan 使用浓度对再生植株生根的影响第59-60页
   ·预培养时间对转化的影响第60页
   ·侵染时间对转化的影响第60-61页
   ·共培养时间对转化的影响第61-62页
   ·下胚轴转化植株的再生第62-63页
   ·子叶转化植株的再生第63页
   ·再生苗的驯化和移栽第63-64页
   ·农杆菌介导苎麻子叶和下胚轴遗传体系的建立第64页
   ·转化体系有效性的验证第64-65页
   ·转化植株 GUS 染色和分子检测第65-69页
 3 讨论第69-72页
   ·影响农杆菌转化苎麻转基因的因素第69-71页
   ·苎麻子叶和下胚轴农杆菌介导遗传转化体系的建立第71页
   ·需进一步开展的工作第71-72页
第四章 苎麻基因枪转化体系的建立第72-83页
 1 材料与方法第72-76页
   ·材料和仪器第72页
   ·方法第72-76页
     ·质粒 DNA 的大量提取第72-73页
     ·茎尖培养第73-74页
     ·子叶愈伤组织再生第74页
     ·影响基因枪转化因素第74-75页
     ·基因枪转化第75页
     ·基因枪茎尖转化体系第75页
     ·基因枪愈伤组织转化体系第75-76页
     ·GUS 瞬间表达的检测和转基因植株的PCR 检测第76页
 2 结果与分析第76-81页
   ·影响苎麻茎尖培养的因素第76-77页
   ·影响苎麻基因枪转化参数的优化第77-79页
   ·基因枪转化苎麻茎尖转基因植株的获得第79-80页
   ·基因枪转化获得抗性愈伤组织第80页
   ·转基因植株分子鉴定第80-81页
   ·GUS 染色第81页
 3 讨论第81-83页
第五章 花粉侵入法获得双价转基因抗虫麻第83-98页
 1 材料与方法第83-87页
   ·材料第83-84页
   ·方法第84-87页
     ·农杆菌的培养第84页
     ·转化受体材料的准备第84页
     ·转化影响因素优化第84页
     ·花粉侵入法转化第84-85页
     ·田间管理和转化种子的收获和贮存第85页
     ·转化后代植株的筛选第85页
     ·GUS 组织染色和分子检测第85-86页
     ·荧光定量PCR 技术检测外源基因的表达第86-87页
 2 结果与分析第87-95页
   ·卡纳霉素致死浓度的确定和 T1 代抗性种子的筛选第87页
   ·不同浓度silwet-77 对转化频率的影响第87-89页
   ·不同侵染方式和处理对转化效果的影响第89-91页
   ·GUS 染色和分子检测第91-92页
   ·荧光定量 PCR 技术检测外源基因的表达第92-95页
 3 讨论第95-98页
   ·影响花序浸泡法转基因的重要因素第95页
   ·提高转化效果的措施第95-96页
   ·需进一步开展的工作第96页
   ·农杆菌介导花粉侵入法的特点及应用前景第96-98页
第六章 结论第98-101页
 1 主要研究结果第98页
 2 三种遗传转化方法的优缺点比较第98-99页
 3 主要创新点第99页
 4 今后研究的方向和目标第99-101页
参考文献第101-111页
致谢第111-112页
作者简历第112-113页

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