| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-47页 |
| 1.猪瘟概述 | 第19-20页 |
| 2.猪瘟病毒的一般生物学特征 | 第20-22页 |
| ·猪瘟病毒的分类地位 | 第20-21页 |
| ·猪瘟病毒的形态及理化特性 | 第21-22页 |
| ·猪瘟病毒的体外培养特性 | 第22页 |
| 3.猪瘟病毒的分子生物学特征 | 第22-32页 |
| ·猪瘟病毒的基因组结构 | 第22-24页 |
| ·猪瘟病毒各蛋白的结构与功能 | 第24-32页 |
| 4.猪瘟病毒的遗传进化和分子流行病学研究 | 第32-33页 |
| 5.猪瘟病毒的检测 | 第33-35页 |
| ·病毒抗原的检测 | 第33页 |
| ·感染性病毒的检测 | 第33-34页 |
| ·病毒特异性抗体的检测 | 第34页 |
| ·病毒核酸的检测 | 第34-35页 |
| 6.猪瘟病毒感染性克隆的构建及其应用 | 第35-47页 |
| ·猪瘟病毒感染性克隆的构建 | 第35-36页 |
| ·猪瘟病毒细胞嗜性的研究 | 第36-38页 |
| ·猪瘟病毒毒力因子的研究 | 第38-44页 |
| ·猪瘟病毒新型重组标记疫苗的研究 | 第44-47页 |
| 第二部分 试验研究 | 第47-132页 |
| 第一章 猪瘟病毒疫苗株与野毒株的RFLP鉴别检测及野毒株的酶切分型 | 第48-60页 |
| 1.材料与方法 | 第49-52页 |
| ·细胞、病毒、载体与试剂 | 第49页 |
| ·病料采集 | 第49页 |
| ·猪瘟病毒特异性检测引物的设计 | 第49-50页 |
| ·病毒RNA提取 | 第50页 |
| ·套式RT-PCR(RT-nPCR) | 第50-51页 |
| ·套式RT-PCR灵敏性、特异性和重复性试验 | 第51-52页 |
| ·应用RFLP鉴别检测猪瘟病毒疫苗株与流行毒株 | 第52页 |
| ·猪瘟病毒流行毒株E2基因的RFLP分型 | 第52页 |
| 2.结果 | 第52-60页 |
| ·套式RT-PCR检测猪瘟病毒体系的建立 | 第52-53页 |
| ·应用RFLP鉴别检测猪瘟病毒疫苗株和流行毒株方法的建立 | 第53-55页 |
| ·组织病料中猪瘟病毒的检测结果 | 第55页 |
| ·猪瘟病毒流行毒株E2基因的RFLP分型 | 第55-60页 |
| 第二章 猪瘟病毒流行毒株全基因组序列分析及其生长特性比较 | 第60-75页 |
| 1.材料与方法 | 第61-65页 |
| ·细胞、病毒、载体与试剂 | 第61-62页 |
| ·病毒的分离与IFA鉴定 | 第62页 |
| ·不同猪瘟病毒毒株全长cDNA的RT-nPCR扩增 | 第62-63页 |
| ·不同猪瘟病毒毒株cDNA的克隆与测序 | 第63-65页 |
| ·序列分析 | 第65页 |
| ·体外生长特性比较试验 | 第65页 |
| 2.结果 | 第65-73页 |
| ·猪瘟病毒的分离与鉴定 | 第65-69页 |
| ·基于全基因组序列的遗传进化分析 | 第69-70页 |
| ·猪瘟病毒不同蛋白氨基酸序列和选择压力分析 | 第70-71页 |
| ·不同猪瘟病毒毒株在PK-15和ST细胞中的生长特性比较 | 第71-73页 |
| 3.讨论 | 第73-75页 |
| 第三章 浙江地区猪瘟病毒E2基因的分子变异特征 | 第75-89页 |
| 1.材料与方法 | 第76-77页 |
| ·载体与试剂 | 第76页 |
| ·猪瘟病毒流行毒株E2的克隆与测序 | 第76页 |
| ·序列分析 | 第76-77页 |
| 2.结果 | 第77-87页 |
| ·浙江地区猪瘟病毒流行毒株的遗传进化分析 | 第77页 |
| ·不同猪瘟病毒流行毒株核苷酸和氨基酸序列比较分析 | 第77-78页 |
| ·猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2选择压力分析 | 第78-87页 |
| 3.讨论 | 第87-89页 |
| 第四章 猪瘟病毒疫苗株E2蛋白单抗的制备及流行毒株E2抗原多样性分析 | 第89-105页 |
| 1.材料与方法 | 第90-97页 |
| ·细胞、病毒、载体与试剂 | 第90-91页 |
| ·猪瘟病毒Erns和E2蛋白原核表达及免疫反应性分析 | 第91-94页 |
| ·猪瘟病毒E2-p7蛋白真核表达及IFA鉴定 | 第94-96页 |
| ·猪瘟病毒C株囊膜糖蛋白E2单克隆抗体的制备 | 第96页 |
| ·囊膜糖蛋白E2单抗的鉴定 | 第96-97页 |
| ·猪瘟病毒流行毒株抗原多样性分析 | 第97页 |
| 2.结果 | 第97-103页 |
| ·猪瘟病毒Erns蛋白和E2蛋白不同抗原区域原核表达与Western blot鉴定 | 第97页 |
| ·猪瘟病毒E2-p7蛋白真核表达与IFA鉴定 | 第97-99页 |
| ·猪瘟病毒C株囊膜糖蛋白E2单抗的制备与鉴定 | 第99-100页 |
| ·猪瘟病毒流行毒株与单抗的反应性 | 第100-103页 |
| 3.讨论 | 第103-105页 |
| 第五章 猪瘟病毒疫苗株的遗传拯救及其子代病毒FL22的鉴定 | 第105-122页 |
| 1.材料与方法 | 第106-114页 |
| ·细胞、病毒、载体与试剂 | 第106-107页 |
| ·质粒改造 | 第107-108页 |
| ·突变位点的回复 | 第108-109页 |
| ·感染性克隆的构建及其稳定性试验 | 第109-110页 |
| ·病毒基因组RNA的转录和电转 | 第110-112页 |
| ·重组病毒的体内外鉴定 | 第112-113页 |
| ·荧光定量PCR体系的建立 | 第113-114页 |
| 2.结果 | 第114-119页 |
| ·感染性克隆的构建和稳定性 | 第114页 |
| ·基因组RNA的体内转录 | 第114-115页 |
| ·基因组RNA的体外转录 | 第115-116页 |
| ·连续传代细胞中病毒蛋白E2的检测 | 第116-117页 |
| ·体外子代感染性病毒粒子的检测 | 第117页 |
| ·体内子代感染性病毒粒子的检测 | 第117-118页 |
| ·子代病毒中遗传标记的稳定遗传 | 第118-119页 |
| ·体外转录RNA在PK-15和ST细胞中的复制和翻译水平比较 | 第119页 |
| 3.讨论 | 第119-122页 |
| 第六章 基于猪瘟病毒疫苗株和流行毒株E2基因的重组病毒拯救与鉴定 | 第122-132页 |
| 1.材料与方法 | 第123-125页 |
| ·细胞、病毒、载体和试剂 | 第123-124页 |
| ·重组病毒全长cDNA的构建 | 第124页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第124页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第124-125页 |
| 2.结果 | 第125-129页 |
| ·重组病毒全长cDNA的构建和稳定性 | 第125-126页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第126-127页 |
| ·重组病毒RFLP分析 | 第127-128页 |
| ·重组病毒FL22-HZ-E2与针对C株E2单抗的反应性分析 | 第128-129页 |
| 3.讨论 | 第129-132页 |
| 论文创新性 | 第132-133页 |
| 结论与展望 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-145页 |
| 攻读博士学位期间发表的或已投稿的论文 | 第145页 |
