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微丝、微管骨架在拟南芥细胞机械响应中的作用

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-12页
1 绪论第12-30页
   ·引言第12页
   ·机械应力对植物生长发育的影响第12-15页
     ·外环境应力对植物生长发育的影响第13-14页
     ·内环境机械应力对植物发育的影响第14-15页
   ·力信号的转导机制第15-20页
     ·植物力信号转导假想模型Ⅰ:机械敏感性离子通道的作用第15-16页
     ·植物力信号转导假想模型Ⅱ:细胞壁-细胞骨架连续体的作用第16-20页
   ·细胞骨架的观察方法第20-21页
   ·植物机械应激响应研究的实验方法学进展第21-25页
     ·施加于植物器官或组织的力学刺激及响应的研究第21-23页
     ·施加于细胞及亚细胞水平的应力刺激及响应研究第23-25页
   ·课题的提出及研究意义第25-26页
   ·课题的研究内容和技术路线第26-30页
     ·课题的研究内容第26-28页
     ·技术路线第28-30页
2 转基因拟南芥悬浮细胞系的建立、优化及应激响应能力检测第30-44页
   ·引言第30-31页
   ·材料与方法第31-34页
     ·材料来源第31页
     ·愈伤组织的诱导第31页
     ·悬浮细胞培养系的建立和优化第31-32页
     ·细胞鲜重的测定方法[130]第32页
     ·细胞形态的检测第32页
     ·悬浮细胞活力的测定第32-33页
     ·细胞骨架的观察第33页
     ·悬浮细胞对外源性机械应力响应能力检测第33页
     ·悬浮细胞对高渗的应激响应能力检测第33-34页
     ·悬浮细胞的冷耐受实验第34页
     ·统计分析第34页
   ·实验结果第34-39页
     ·愈伤组织的诱导第34-36页
     ·悬浮细胞培养体系的建立第36页
     ·悬浮细胞培养体系的优化第36-38页
     ·转基因悬浮细胞内细胞骨架清晰可见第38页
     ·悬浮细胞对环境刺激的应激响应能力第38-39页
   ·讨论第39-42页
   ·结论第42-44页
3 拟南芥悬浮细胞中细胞壁-细胞骨架的联系研究第44-58页
   ·引言第44-45页
   ·材料与方法第45-46页
     ·选择性酶解细胞壁第45页
     ·细胞形态的检测第45页
     ·悬浮细胞的包埋第45页
     ·细胞质壁分离率的测定第45页
     ·细胞骨架的CD,Oryzalin 处理第45-46页
     ·RGD 肽处理第46页
     ·共聚焦显微镜实时观察选择性酶解细胞壁对细胞骨架的影响第46页
     ·统计分析第46页
   ·实验结果第46-52页
     ·选择性酶解细胞壁对细胞形态和质壁分离率的影响第46-48页
     ·CD 或oryzalin 处理对细胞质壁分离率的影响第48页
     ·选择性酶解细胞壁对细胞骨架的影响第48-51页
     ·RGD 肽预处理对悬浮细胞质壁分离率的影响第51页
     ·RGD 肽预处理对细胞骨架的影响第51页
     ·RGD 肽预处理后选择性酶解细胞壁对微丝骨架的干扰第51-52页
   ·讨论第52-55页
   ·结论第55-58页
4 膨压响应中,拟南芥悬浮细胞微丝、微管骨架的动态第58-76页
   ·引言第58-59页
   ·材料与方法第59-61页
     ·质壁分离法测细胞渗透压第59页
     ·改变细胞膨压方法的建立第59页
     ·药理学方法处理细胞骨架第59页
     ·悬浮细胞的包埋第59-60页
     ·膨压动态改变状态下细胞骨架动态的实时观察第60页
     ·细胞骨架荧光强度的测量及变化分析第60页
     ·细胞的长短轴测量、沿短轴和长轴方向排列的微管数量比的统计第60-61页
     ·不同形态悬浮细胞的壁表面应力初步建模分析第61页
     ·统计分析第61页
   ·实验结果第61-71页
     ·动态膨压状态下,微管骨架的实时动态第61-63页
     ·膨压波动时的微管骨架荧光强度变化趋势第63页
     ·动态膨压状态下,微丝骨架的实时动态第63-65页
     ·膨压波动时的微丝骨架荧光强度变化趋势第65页
     ·CD 处理对膨压波动时微管骨架的排布动态及荧光强度的影响第65-69页
     ·Oryzalin 处理对膨压波动时微丝骨架的排布动态及荧光强度的影响第69-70页
     ·微管的排布与细胞形态的相关性第70页
     ·细胞形态与细胞壁应力的分布模式第70-71页
   ·讨论第71-75页
   ·结论第75-76页
5 钙阻断对膨压响应中拟南芥悬浮细胞微丝、微管骨架动态的影响第76-102页
   ·引言第76页
   ·材料与方法第76-78页
     ·药物处理阻断钙离子通道第76-77页
     ·药理学方法处理细胞骨架第77页
     ·细胞的包埋固定第77页
     ·质壁分离率的测定第77页
     ·膨压动态改变状态下细胞骨架动态的实时观察第77-78页
     ·细胞骨架荧光强度的测量及变化分析第78页
     ·统计分析第78页
   ·实验结果第78-95页
     ·氯化镧和钌红对细胞质壁分离率的影响第78页
     ·Phalloidin、Taxol 预处理影响细胞的质壁分离率第78-79页
     ·氯化镧、钌红和Phalloidin 处理对细胞微丝骨架的荧光强度的影响第79-81页
     ·氯化镧、钌红和Taxol 处理对细胞微管骨架荧光强度的影响第81页
     ·氯化镧处理对微丝、微管骨架的排布动态和相对荧光强度的影响第81-86页
     ·钌红处理影响微丝、微管骨架的排布动态和相对荧光强度的变化第86-91页
     ·Phalloidin 处理对微丝骨架的排布动态和相对荧光强度的影响第91页
     ·Taxol 处理对微管骨架的排布动态和相对荧光强度的影响第91-95页
   ·讨论第95-100页
   ·结论第100-102页
6 共聚焦显微镜下可控机械力加载方法的探索第102-112页
   ·引言第102-103页
   ·材料与方法第103-104页
     ·原子力显微镜和共聚焦显微镜联机观察微管骨架动态第103页
     ·共聚焦显微镜下压应力加载及细胞骨架动态观察第103-104页
     ·药理学方法处理细胞骨架第104页
     ·IPP 软件分析骨架动态第104页
   ·实验结果第104-110页
     ·原子力显微镜探针加载下的微管骨架排布第104-106页
     ·动态加压下细胞骨架的表现第106页
     ·Oryzalin 解聚微管影响微丝骨架对压应力的响应第106-110页
   ·讨论第110-111页
   ·结论第111-112页
7 结论与后续工作建议第112-114页
   ·本文主要结论第112-113页
   ·后续工作建议第113-114页
致谢第114-116页
参考文献第116-130页
附录第130页

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