| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 前言 | 第11页 |
| 2 研究现状 | 第11-15页 |
| ·油菜菌核病的症状及其侵染循环 | 第11-12页 |
| ·菌核病病原核盘菌的致病机理 | 第12-13页 |
| ·寄主的抗病机理 | 第13-14页 |
| ·避病 | 第13页 |
| ·形态结构的抗病性 | 第13-14页 |
| ·油菜抗病的组织病理学及生理生化特点 | 第14页 |
| ·草酸和草酸降解酶 | 第14-15页 |
| ·草酸的来源与危害 | 第14页 |
| ·草酸的分解 | 第14-15页 |
| ·草酸氧化酶的研究 | 第15-19页 |
| ·OxO的发现 | 第15页 |
| ·Germin的结构特点 | 第15-17页 |
| ·Germin在发育过程中的作用 | 第17-18页 |
| ·Germin在植物防御过程中的作用 | 第18-19页 |
| ·转基因植物的生物安全 | 第19-23页 |
| ·转基因植物对环境安全的影响 | 第20页 |
| ·转基因植物对食物安全的影响 | 第20页 |
| ·标记基因的技术发展 | 第20-23页 |
| 3 本研究的目的意义 | 第23-24页 |
| 第二章 大麦OxO基因和大肠杆菌PMI基因的克隆 | 第24-37页 |
| 1.材料 | 第24-26页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·主要培养基 | 第24-25页 |
| ·涉及抗生素的配置 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·常用缓冲液配方 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶配方 | 第26页 |
| 2.方法 | 第26-34页 |
| ·大麦OxO基因的克隆 | 第26-33页 |
| ·大麦的发芽 | 第26页 |
| ·RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·RNA的纯化 | 第27-28页 |
| ·大麦OxO基因引物的设计 | 第28页 |
| ·反转录第一链的合成 | 第28页 |
| ·PCR扩增OxO基因全长cDNA | 第28-29页 |
| ·电泳分析 | 第29页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第29-30页 |
| ·目的产物与T-载体的连接反应 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第31页 |
| ·质粒DNA小量提取 | 第31-33页 |
| ·质粒大小检测 | 第33页 |
| ·PMI基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·PMI基因引物的设计 | 第33页 |
| ·PMI基因的来源 | 第33页 |
| ·菌落PCR扩增PMI基因 | 第33-34页 |
| ·电泳分析 | 第34页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第34页 |
| ·目的产物与T-载体的连接反应 | 第34页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第34页 |
| ·质粒DNA小量提取 | 第34页 |
| ·质粒大小检测 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-36页 |
| ·RNA的电泳电测 | 第34-35页 |
| ·OxO基因的测序及同源性比对 | 第35页 |
| ·PMI基因的测序及同源性比对 | 第35-36页 |
| 4.小结 | 第36-37页 |
| 第三章 pCAOxO-PMI载体的构建及农杆菌转化 | 第37-45页 |
| 1.材料 | 第37-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·主要培养基 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.方法 | 第38-43页 |
| ·OxO基因的连接 | 第39-40页 |
| ·载体的酶切 | 第39页 |
| ·胶回收 | 第39页 |
| ·载体的连接 | 第39页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第39页 |
| ·质粒提取 | 第39-40页 |
| ·PMI基因的连接 | 第40-41页 |
| ·载体的酶切 | 第40页 |
| ·胶回收 | 第40页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第40页 |
| ·载体的回收 | 第40-41页 |
| ·载体的连接 | 第41页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第41页 |
| ·质粒提取 | 第41页 |
| ·筛选正向插入克隆 | 第41页 |
| ·pCAOxO-PMI载体的农杆菌转化 | 第41-43页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·农杆菌的转化 | 第42页 |
| ·转化农杆菌的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.结果 | 第43-45页 |
| ·双酶切时间的掌控 | 第43页 |
| ·大肠杆菌阳性转化子的筛选 | 第43页 |
| ·筛选正向插入克隆 | 第43-44页 |
| ·使用双重PCR对转化农杆菌的鉴定 | 第44-45页 |
| 第四章 油菜的转化植株的获得 | 第45-53页 |
| 1.材料 | 第45-47页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·质粒及菌株 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·生化试剂 | 第45页 |
| ·仪器设备 | 第45页 |
| ·培养条件 | 第45-47页 |
| 2.方法 | 第47-49页 |
| ·油菜对甘露糖敏感性测试 | 第47-48页 |
| ·培养基配置 | 第47页 |
| ·无菌苗的获得 | 第47页 |
| ·小苗转接 | 第47页 |
| ·下胚轴转接 | 第47-48页 |
| ·油菜的遗传转化 | 第48页 |
| ·油菜下胚轴的预培养 | 第48页 |
| ·油菜下胚轴与农杆菌共培养 | 第48页 |
| ·下胚轴的分化与植株再生 | 第48页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第48-49页 |
| ·油菜基因组总DNA的提取 | 第48-49页 |
| ·再生苗的PCR检测 | 第49页 |
| 3.结果与分析 | 第49-53页 |
| ·油菜对甘露糖敏感性测试结果 | 第49-50页 |
| ·油菜转化体系的确定 | 第50-51页 |
| ·再生植株的获得 | 第51页 |
| ·再生苗的PCR检测 | 第51-53页 |
| 第五章 讨论 | 第53-56页 |
| 1.分子生物学方面的鉴定 | 第53页 |
| 2.外源基因在转化植株的表达和遗传 | 第53-54页 |
| 3.试管苗的移栽成活率 | 第54页 |
| 4.光照强度 | 第54页 |
| 5.甘露糖的筛选 | 第54-55页 |
| 6.PMI选择标记的应用前景 | 第55页 |
| 7.后续研究设想 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60页 |