| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| ·禽流感病毒分类及命名 | 第10页 |
| ·禽流感病毒血清型分类 | 第10页 |
| ·禽流感病毒亚型分类 | 第10页 |
| ·依据致病性分类 | 第10页 |
| ·命名规则 | 第10页 |
| ·禽流感病毒的理化特性 | 第10-11页 |
| ·病毒组份 | 第11页 |
| ·理化因素对流感病毒的影响 | 第11页 |
| ·禽流感病毒的基因组及其编码蛋白 | 第11-12页 |
| ·禽流感病毒的形态和结构 | 第12-13页 |
| ·流感病毒的增殖过程 | 第13-16页 |
| ·流感病毒非结构蛋白NS1和NS2的功能 | 第16-17页 |
| ·酵母双杂交技术介绍 | 第17-20页 |
| ·酵母双杂交技术原理 | 第17-18页 |
| ·酵母双杂交技术平台的应用 | 第18-19页 |
| ·传统酵母双杂交技术的缺点 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物双杂交系统 | 第20页 |
| ·GST Pull-down技术介绍 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-40页 |
| ·材料 | 第22-28页 |
| ·毒株、菌株 | 第22页 |
| ·酵母双杂交文库与氨基酸 | 第22-23页 |
| ·载体 | 第23-24页 |
| ·抗体 | 第24页 |
| ·酶类 | 第24页 |
| ·抗生素 | 第24-25页 |
| ·酵母双杂交用药品、试剂 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·质粒提取及DNA电泳用试剂及溶液 | 第26-27页 |
| ·酵母质粒营救所需溶液 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE电泳用试剂及溶液 | 第27-28页 |
| ·Western blot缓冲液及试剂 | 第28页 |
| ·其他药品 | 第28页 |
| ·重要仪器和设备 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-40页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·反转录病毒基因组 | 第30页 |
| ·PCR扩增NS2片段 | 第30页 |
| ·DNA片段的回收 | 第30-31页 |
| ·PCR回收产物、载体双酶切 | 第31页 |
| ·连接反应 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·连接产物的转化与单克隆的扩大培养 | 第32页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的验证 | 第33页 |
| ·酵母双杂交 | 第33-37页 |
| ·原核表达 | 第37-38页 |
| ·GST pull-down | 第38-40页 |
| 3 结果 | 第40-49页 |
| ·利用酵母双杂交技术从人的胎脑cDNA文库筛选与NS2相互作用的配体 | 第40-45页 |
| ·诱饵质粒构建 | 第40-41页 |
| ·AH109酵母菌株表型验证 | 第41页 |
| ·诱饵质粒pGBKT7-NS2转入AH109及自激活验证 | 第41页 |
| ·pGBKT7-NS2对AH109毒性的检测 | 第41页 |
| ·评价文库滴度 | 第41页 |
| ·酵母的接合效率 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的质粒提取 | 第42页 |
| ·酵母双杂交系统的回转验证 | 第42-43页 |
| ·进一步排除假阳性 | 第43页 |
| ·阳性克隆的测序结果 | 第43-45页 |
| ·GST pull-down进一步验证相互作用 | 第45-49页 |
| ·pET32a-Preys克隆 | 第45-46页 |
| ·NS2原核表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·HIS-preys表达 | 第47-48页 |
| ·GST pull-down验证猎物蛋白STMN2与NS2的相互作用 | 第48-49页 |
| 4.讨论 | 第49-51页 |
| ·NS2作为诱饵的可行性 | 第49-50页 |
| ·候选猎物阳性克隆的剔除 | 第50页 |
| ·GST pull-down进一步验证互作情况 | 第50-51页 |
| 5 总结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-64页 |
| 简历 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
