| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-21页 |
| 1.1 四碳二羧酸简述 | 第9页 |
| 1.2 发酵法生产四碳二羧酸有利于可持续发展 | 第9-11页 |
| 1.3 发酵法生产目标产品的代谢工程策略 | 第11页 |
| 1.4 产苹果酸代谢途径 | 第11-16页 |
| 1.5 生物法合成苹果酸的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.6 本文内容 | 第20-21页 |
| 第二章 研究内容 | 第21-50页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第21-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 引物及DNA序列测定 | 第22-25页 |
| 2.1.3 分子克隆工具酶与试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.4 培养基 | 第25页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 酵母完整细胞转化法 | 第25-26页 |
| 2.2.2 酵母染色体提取 | 第26页 |
| 2.2.3 大肠杆菌转化 | 第26页 |
| 2.2.4 大肠杆菌质粒小量提取 | 第26页 |
| 2.2.5 酿酒酵母质粒小量提取 | 第26-27页 |
| 2.2.6 酵母基因敲除 | 第27页 |
| 2.2.7 标记基因Kan MX的丢失 | 第27页 |
| 2.2.8 蛋白质的提取及浓度测定 | 第27-28页 |
| 2.2.9 苹果酸脱氢酶酶活测定 | 第28页 |
| 2.2.10 丙酮酸激酶酶活性测定 | 第28页 |
| 2.2.11 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性测定 | 第28-29页 |
| 2.2.12 菌株保藏 | 第29页 |
| 2.2.13 分批摇瓶发酵 | 第29页 |
| 2.2.14 发酵液组分分析 | 第29页 |
| 2.2.15 代谢参数计算 | 第29-30页 |
| 2.3 酿酒酵母经草酰乙酸还原途径产苹果酸的初步研究 | 第30-50页 |
| 2.3.1 强化酿酒酵母从PEP经草酰乙酸合成苹果酸的途径 | 第30-35页 |
| 2.3.1.1 带有苹果酸合成途径基因的表达质粒构建 | 第31-34页 |
| 2.3.1.2 构建苹果酸脱氢酶活性增强的重组酵母 | 第34页 |
| 2.3.1.3 重组菌株苹果酸发酵特征 | 第34-35页 |
| 2.3.2 强化酿酒酵母PEP到草酰乙酸的转化 | 第35-43页 |
| 2.3.2.1 磷酸烯醇式丙酮酸羧化/激酶表达质粒构建 | 第36-37页 |
| 2.3.2.2 磷酸烯醇式丙酮酸羧/激酶活性 | 第37-41页 |
| 2.3.2.3 重组菌株苹果酸发酵特征 | 第41-43页 |
| 2.3.3 弱化酿酒酵母丙酮酸生成途径 | 第43-50页 |
| 2.3.3.1 弱化丙酮酸激酶表达质粒构建 | 第44-46页 |
| 2.3.3.2 丙酮酸激酶基因PYK1敲除 | 第46-47页 |
| 2.3.3.3 重组菌株丙酮酸激酶活性测定 | 第47-48页 |
| 2.3.3.4 弱化丙酮酸激酶对菌株产苹果酸特征的影响 | 第48-50页 |
| 全文总结与展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第58页 |
