| 摘要 | 第4-6页 |
| BASTRACT | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 棉花概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 棉花简介 | 第12页 |
| 1.1.2 棉花产业背景 | 第12页 |
| 1.1.3 棉花研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2 分子伴侣AKR2A研究 | 第13-15页 |
| 1.2.1 分子伴侣的基本概念 | 第13-14页 |
| 1.2.2 AKR2A的基本概念 | 第14-15页 |
| 1.3 KCS基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 脂肪酸 | 第16-19页 |
| 1.4.1 脂肪酸的分类 | 第17页 |
| 1.4.2 脂肪酸的合成 | 第17-18页 |
| 1.4.3 脂肪酸的重要性 | 第18-19页 |
| 1.4.4 超长链脂肪酸 | 第19页 |
| 1.5 荧光定量PCR | 第19-20页 |
| 1.5.1 实时荧光定量PCR原理 | 第19页 |
| 1.5.2 荧光阈值、Ct值 | 第19页 |
| 1.5.3 荧光探针和荧光染料 | 第19-20页 |
| 1.5.4 数据分析 | 第20页 |
| 1.6 气相色谱 | 第20-21页 |
| 1.6.1 气相色谱法原理 | 第20页 |
| 1.6.2 气相色谱构成 | 第20-21页 |
| 1.6.3 气相色谱分析方法 | 第21页 |
| 1.6.4 气相色谱应用 | 第21页 |
| 1.7 本论文研究的目的、意义及主要内容 | 第21-23页 |
| 1.7.1 研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 质粒和菌种 | 第23页 |
| 2.1.3 主要实验耗材与仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5 溶液与培养基配制 | 第25-26页 |
| 2.1.6 引物合成 | 第26-27页 |
| 2.2 棉花再生植株获得 | 第27-29页 |
| 2.2.1 种子预处理制备 | 第27页 |
| 2.2.2 无菌苗制备 | 第27-28页 |
| 2.2.3 农杆菌制备 | 第28页 |
| 2.2.4 农杆菌浸染转化和共培养 | 第28页 |
| 2.2.5 抗性愈伤组织的筛选 | 第28页 |
| 2.2.6 愈伤组织的增殖和分化 | 第28页 |
| 2.2.7 胚胎发芽 | 第28页 |
| 2.2.8 获得植株 | 第28-29页 |
| 2.3 棉花转基因植株鉴定 | 第29-33页 |
| 2.3.1 基因组DNA提取 | 第29页 |
| 2.3.2 PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR (RT-qPCR)鉴定 | 第30-32页 |
| 2.3.4 Western blot鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 转基因棉花表型调查 | 第33页 |
| 2.4.1 棉籽和棉纤维产量的测定 | 第33页 |
| 2.4.2 不同发育时期棉纤维长度的测定 | 第33页 |
| 2.5 油脂含量和脂肪酸组分分析 | 第33-34页 |
| 2.5.1 总含油量 | 第33-34页 |
| 2.5.2 气相色谱分析 | 第34页 |
| 2.6 脂肪酸合成相关基因表达分析 | 第34-35页 |
| 2.6.1 拟南芥总RNA提取 | 第34页 |
| 2.6.2 棉花种子RNA提取 | 第34页 |
| 2.6.3 cDNA合成 | 第34页 |
| 2.6.4 脂肪酸合成相关基因表达分析 | 第34-35页 |
| 2.7 AKR2A互作蛋白筛选 | 第35-38页 |
| 2.7.1 重组质粒构建 | 第35-36页 |
| 2.7.2 大肠杆菌感受态制备 | 第36页 |
| 2.7.3 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第36页 |
| 2.7.4 重组质粒的鉴定与提取 | 第36页 |
| 2.7.5 大肠杆菌质粒提取 | 第36-37页 |
| 2.7.6 酵母感受态细胞制备 | 第37页 |
| 2.7.7 酵母感受态细胞转化 | 第37-38页 |
| 2.7.8 阳性酵母菌落质粒提取 | 第38页 |
| 2.7.9 测序、比对 | 第38页 |
| 2.7.10 互作区域验证 | 第38页 |
| 2.8 免疫共沉淀 | 第38-39页 |
| 2.9 拟南芥栽培方法 | 第39-40页 |
| 2.9.1 种子消毒 | 第39页 |
| 2.9.2 播种 | 第39页 |
| 2.9.3 春化 | 第39页 |
| 2.9.4 移栽、培养 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-54页 |
| 3.1 棉花再生植株获得 | 第40页 |
| 3.2 棉花转基因植株鉴定 | 第40-42页 |
| 3.2.1 PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.3 Western blot鉴定 | 第42页 |
| 3.3 转基因棉花脂肪酸分析 | 第42-45页 |
| 3.3.1 转基因棉花种子含油量分析 | 第42-43页 |
| 3.3.2 转基因棉花种子脂肪酸分析 | 第43-45页 |
| 3.4 转基因棉花种子脂肪酸合成相关基因差异表达分析 | 第45-48页 |
| 3.5 转基因棉花农艺性状分析 | 第48-49页 |
| 3.5.1 转基因棉花产量分析 | 第48页 |
| 3.5.2 不同棉纤维发育阶段的纤维长度差异分析 | 第48-49页 |
| 3.6 与AKR2A互作蛋白的筛选结果 | 第49页 |
| 3.7 AKR2A与KCS1的互作关系 | 第49-51页 |
| 3.8 转基因拟南芥KCS家族基因表达分析 | 第51-52页 |
| 3.8.1 AKR2A、KCS1单基因过表达和双基因过表达植株 | 第51页 |
| 3.8.2 AKR2A正调控KCS家族基因的表达 | 第51-52页 |
| 3.9 转基因拟南芥种子油脂含量分析 | 第52-53页 |
| 3.10 转基因拟南芥种子脂肪酸组分分析 | 第53-54页 |
| 4 结论 | 第54-56页 |
| 4.1 全文总结 | 第54页 |
| 4.2 论文的创新点 | 第54-55页 |
| 4.3 论文的不足之处 | 第55-56页 |
| 5 展望 | 第56-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-65页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第65-66页 |
| 8 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
