基于FRET的神经突触活性带张力可视化探针
| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 1 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 神经元及突触活性带 | 第7-9页 |
| 1.2 胞吞与胞吐 | 第9-10页 |
| 1.3 荧光共振能量转移 | 第10-11页 |
| 1.4 研究细胞张力的方法 | 第11-12页 |
| 1.5 本文的研究目的和意义 | 第12-14页 |
| 2 突触活性带张力探针的设计与制备 | 第14-32页 |
| 2.1 探针设计 | 第14-16页 |
| 2.1.1 探针工作原理 | 第14-15页 |
| 2.1.2 张力探针及其对照组探针设计 | 第15-16页 |
| 2.2 材料 | 第16-18页 |
| 2.2.1 仪器 | 第16-17页 |
| 2.2.2 试剂 | 第17页 |
| 2.2.3 溶液 | 第17-18页 |
| 2.3 方法 | 第18-27页 |
| 2.3.1 人cDNA制备 | 第18-19页 |
| 2.3.2 设计引物 | 第19-21页 |
| 2.3.3 PCR扩增 | 第21-23页 |
| 2.3.4 核酸纯化 | 第23-24页 |
| 2.3.5 TA克隆 | 第24页 |
| 2.3.6 转化感受态细胞 | 第24-25页 |
| 2.3.7 质粒提取 | 第25页 |
| 2.3.8 限制性酶切 | 第25页 |
| 2.3.9 连接及转化 | 第25-26页 |
| 2.3.10 菌落筛选 | 第26页 |
| 2.3.11 HeLa细胞培养与转染 | 第26-27页 |
| 2.4 结果 | 第27-30页 |
| 2.4.1 探针重组T载体构建 | 第27-29页 |
| 2.4.2 重组T载体酶切 | 第29页 |
| 2.4.3 菌落PCR筛选 | 第29-30页 |
| 2.4.4 HeLa细胞转染验证 | 第30页 |
| 2.5 讨论 | 第30-32页 |
| 3 囊泡释放过程中活性带区域张力的变化 | 第32-48页 |
| 3.1 材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 仪器 | 第32页 |
| 3.1.2 试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 溶液 | 第32-34页 |
| 3.2 方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 SD鼠大脑皮层神经细胞的提取和培养 | 第34-35页 |
| 3.2.2 神经细胞的鉴定 | 第35页 |
| 3.2.3 皮层神经元的转染 | 第35-36页 |
| 3.2.4 神经细胞染色 | 第36页 |
| 3.2.5 图像采集 | 第36-37页 |
| 3.2.6 图像处理 | 第37-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-45页 |
| 3.3.1 神经元染色鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.2 神经突触的着色 | 第39页 |
| 3.3.3 探针BKTS在囊泡释放过程中的变化 | 第39-41页 |
| 3.3.4 探针RKTS在囊泡释放过程中的变化 | 第41-43页 |
| 3.3.5 探针CKTS在囊泡释放过程中的变化 | 第43-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录A 处理荧光图片的程序 | 第53-57页 |
| 附录B Kmeans处理荧光图片的程序 | 第57-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
