| 个人简历 | 第3-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 前言 | 第19-25页 |
| 第一章 Cbf1K271 位泛素化修饰不调控自身稳定性 | 第25-50页 |
| 1 实验材料 | 第25-31页 |
| 1.1 实验质粒和菌株 | 第25页 |
| 1.2 实验仪器及试剂 | 第25-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-44页 |
| 2.1 酵母感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| 2.2 LiAc/PEG酵母的高效转化法 | 第32页 |
| 2.3 JMP024-cbf1△菌株构建和阳性克隆筛选 | 第32-33页 |
| 2.4 JMP024-3HA-Cbf1 菌株构建和阳性克隆筛选 | 第33-38页 |
| 2.5 JMP024-3HA-Cbf1K271R菌株构建和阳性克隆筛选 | 第38-41页 |
| 2.6 Western Blot检测Cbf1 表达量 | 第41-44页 |
| 2.7 Cbf1 突变和野生型菌株生长特性表征 | 第44页 |
| 3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.1 JMP024-cbf1△菌株的构建 | 第44-45页 |
| 3.2 JMP024-3HA-Cbf1 菌株的构建 | 第45-46页 |
| 3.3 JMP024-3HA-Cbf1K271R菌株的构建 | 第46-47页 |
| 3.4 K271R点突变菌株Cbf1 蛋白表达量WB检测 | 第47页 |
| 3.5 K271R点突变菌株生长曲线测绘和表型检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论与小结 | 第48-50页 |
| 第二章 Cbf1 K271 位点泛素化修饰及其在甲硫氨酸合成通路中生物学功能研究 | 第50-63页 |
| 1 实验材料 | 第50-51页 |
| 1.1 实验菌株、仪器和试剂 | 第50-51页 |
| 2 实验方法 | 第51-56页 |
| 2.1 SILAC标记策略 | 第51页 |
| 2.2 StageTip快速分离制备质谱样品 | 第51-52页 |
| 2.3 肽段样品质谱分析 | 第52-53页 |
| 2.4 利用MaxQuant搜库软件进行数据处理 | 第53页 |
| 2.5 实时定量PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)实验 | 第53-56页 |
| 3 实验结果 | 第56-61页 |
| 3.1 SILAC标记检测Cbf1 表达量 | 第56页 |
| 3.2 甲硫氨酸合成通路相关蛋白表达量差异 | 第56-59页 |
| 3.3 甲硫氨酸合成通路相关基因转录水平验证 | 第59-61页 |
| 3.4 Cbf1 突变株点板表型实验 | 第61页 |
| 4 讨论与小结 | 第61-63页 |
| 第三章 Cbf1 K271 位点特异性调控底物蛋白筛选 | 第63-70页 |
| 1 实验材料 | 第63页 |
| 1.1 实验菌株、仪器和试剂 | 第63页 |
| 2 实验方法 | 第63-64页 |
| 2.1 差异蛋白功能分析 | 第63-64页 |
| 3 实验结果 | 第64-68页 |
| 3.1 Cbf1K271R蛋白质组定量结果 | 第64-65页 |
| 3.2 Cbf1 K271R差异蛋白筛选和功能分析 | 第65-66页 |
| 3.3 差异蛋白编码基因转录水平验证 | 第66-67页 |
| 3.4 PIC2 蛋白相关表型生长特征研究 | 第67-68页 |
| 4 讨论与小结 | 第68-70页 |
| 第四章 Cbf1 K271 位点泛素化修饰影响Cbf1与DNA的结合能力 | 第70-76页 |
| 1 实验材料、仪器和方法 | 第70页 |
| 1.1 实验材料和试剂 | 第70页 |
| 2 实验方法 | 第70-73页 |
| 2.1 DNA Pulldown富集Cbf1 转录复合物 | 第70-72页 |
| 2.2 质谱样品制备 | 第72-73页 |
| 3 实验结果 | 第73-74页 |
| 3.1 DNA Pulldown纯化Cbf1 蛋白定量结果 | 第73-74页 |
| 4 讨论与小结 | 第74-76页 |
| 全文总结 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 综述 | 第83-100页 |
| 参考文献 | 第95-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
