| Abstract | 第9-10页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abbreviations | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-32页 |
| 1.1 概述mRNA的翻译过程和eIF3在翻译过程中的作用 | 第14-19页 |
| 1.1.1 翻译起始 | 第15-17页 |
| 1.1.2 翻译延伸 | 第17-18页 |
| 1.1.3 翻译终止 | 第18页 |
| 1.1.4 核糖体循环 | 第18页 |
| 1.1.5 eIF3和癌症的关系 | 第18-19页 |
| 1.2 eIF3e与癌症的关系 | 第19-21页 |
| 1.2.1 eIF3e的发现 | 第19页 |
| 1.2.2 eIF3e在乳腺癌中的作用 | 第19-20页 |
| 1.2.3 eIF3e在其他人类癌症中的作用 | 第20-21页 |
| 1.3 eIF3e在fission yeast s pombe的作用 | 第21-28页 |
| 1.3.1 缺乏eIF3e和d的裂殖酵母在翻译起始上有缺陷 | 第22-24页 |
| 1.3.2 eIF3缺乏导致糖酵解切换,氧化应激和寿命缩短 | 第24-28页 |
| 1.4 eIF3e在人类细胞中的特异性功能 | 第28-30页 |
| 1.4.1 eIF3e促进线粒体蛋白的表达 | 第28-30页 |
| 1.4.2 eIF3e可能与线粒体基因的5'UTR序列相互作用 | 第30页 |
| 1.5 研究意义 | 第30-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-46页 |
| 2.1 细胞培养 | 第32页 |
| 2.2 Western blot | 第32-33页 |
| 2.2.1 准备蛋白样品 | 第32页 |
| 2.2.2 跑SDS-PAGE胶和转膜 | 第32页 |
| 2.2.3 封闭和抗体孵育 | 第32-33页 |
| 2.2.4 显影 | 第33页 |
| 2.3 siRNA和质粒转染 | 第33页 |
| 2.4 纯化总RNA | 第33-34页 |
| 2.5 逆转录 | 第34页 |
| 2.6 RNA免疫共沉淀和荧光定量PCR | 第34-36页 |
| 2.6.1 准备蛋白样品(Hela细胞) | 第34-35页 |
| 2.6.2 抗体和蛋白孵育 | 第35页 |
| 2.6.3 Beads和抗体-蛋白复合物孵育 | 第35页 |
| 2.6.4 移除beads上的非特异性结合 | 第35页 |
| 2.6.5 分离RNA | 第35-36页 |
| 2.6.6 逆转录和荧光定量PCR | 第36页 |
| 2.7 快速扩增cDNA的5'端(5'RACE) | 第36-39页 |
| 2.7.1 设计基因特异性引物 | 第36-37页 |
| 2.7.2 制备RACE-ready cDNA | 第37-38页 |
| 2.7.3 快速扩增cDNA ends | 第38页 |
| 2.7.4 辨别目的片段和测序 | 第38-39页 |
| 2.8 在质粒里去除或者插入某片段 | 第39-41页 |
| 2.8.1 原理图 | 第39-40页 |
| 2.8.2 设计引物 | 第40页 |
| 2.8.3 操作 | 第40-41页 |
| 2.9 体外转录 | 第41-42页 |
| 2.9.1 流程 | 第41页 |
| 2.9.2 操作 | 第41-42页 |
| 2.10 体内翻译系统 | 第42页 |
| 2.11 体外翻译系统 | 第42-44页 |
| 2.11.1 准备细胞 | 第42-43页 |
| 2.11.2 裂解细胞 | 第43页 |
| 2.11.3 准备体外翻译反应体系 | 第43-44页 |
| 2.12 实验常用缓冲液 | 第44-46页 |
| 3 实验结果 | 第46-61页 |
| 3.1 在人乳腺细胞中eIF3e促进线粒体蛋白尤其是ETC蛋白的表达 | 第46-48页 |
| 3.2 下调eIF3e的表达不会影响ETC的mRNA水平 | 第48-49页 |
| 3.3 eIF3能直接与线粒体蛋白的mRNA相互作用 | 第49-51页 |
| 3.4 MCF7细胞中线粒体基因的5'UTR序列 | 第51-56页 |
| 3.4.1 eIF3e可以调控线粒体基因的5'UTR序列 | 第51-53页 |
| 3.4.2 用5'RACE的方法找到的MCF7细胞中线粒体基因的5'UTR序列 | 第53-55页 |
| 3.4.3 被选择的线粒体基因的5' UTR序列 | 第55-56页 |
| 3.5 体内翻译实验表明eIF3e可以促进融合了线粒体基因5'UTR序列的荧光素酶质粒表达 | 第56-58页 |
| 3.6 体内翻译实验表明eIF3e可以促进融合了线粒体基因5'UTR序列的荧光素酶mRNA翻译成蛋白 | 第58-61页 |
| 3.6.1 体外转录 | 第58-59页 |
| 3.6.2 利用Hela细胞提取物体外翻译mRNA | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-66页 |
| 4.1 eIF3复合物调控能量代谢相关蛋白的翻译过程 | 第61-62页 |
| 4.2 eIF3e通过与其5'UTR序列相互作用特异性调控线粒体mRNA的翻译 | 第62-64页 |
| 4.3 eIF3e可以作为治疗癌症的新靶点 | 第64-65页 |
| 4.4 展望 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66页 |
| 6 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
