| 缩略语表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-12页 |
| 英文摘要 | 第12-16页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 文献回顾 | 第18-29页 |
| 第一部分 miR-302a在结直肠癌细胞及组织中的表达 | 第29-33页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| 1.1 细胞系 | 第29页 |
| 1.2 组织标本 | 第29页 |
| 1.3 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-31页 |
| 2.1 细胞培养 | 第30页 |
| 2.2 总RNA提取 | 第30页 |
| 2.3 实时定量PCR检测miR-302a表达 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-32页 |
| 3.1 miR-302a在结直肠癌细胞及组织中表达减低 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 第二部分 miR-302a在结直肠癌恶行生物学行为中的功能研究 | 第33-44页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| 1.1 细胞系 | 第33页 |
| 1.2 载体 | 第33页 |
| 1.3 实验动物 | 第33页 |
| 1.4 主要试剂 | 第33-34页 |
| 2 方法 | 第34-38页 |
| 2.1 miR-302a功能获得及功能缺失模型构建 | 第34-35页 |
| 2.2 结直肠癌增殖及转移能力的功能实验 | 第35-37页 |
| 2.3 结直肠癌细胞药物敏感性的功能实验 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-42页 |
| 3.1 成功构建miR-302a功能获得及缺失模型 | 第38-39页 |
| 3.2 miR-302a不影响结直肠癌细胞增殖但可抑制结直肠癌转移 | 第39-41页 |
| 3.3 miR-302a可增加结直肠癌细胞对奥沙利铂及西妥昔单抗治疗敏感性 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三部分 miR-302a的靶分子筛选及鉴定 | 第44-53页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1 细胞系 | 第44页 |
| 1.2 载体 | 第44页 |
| 1.3 主要试剂 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| 2.1 miR-302a靶基因预测 | 第45页 |
| 2.2 双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-302a与靶基因的直接相互作用 | 第45-48页 |
| 2.3 WesternBlot检测细胞中靶分子NFIB及CD44表达 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-52页 |
| 3.1 生物信息学预测miR-302a靶基因 | 第49页 |
| 3.2 NFIB和CD44是miR-302a的直接靶分子 | 第49-51页 |
| 3.3 miR-302a可抑制NFIB及CD44的蛋白表达 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第四部分 miR-302a调控结直肠癌转移的机制研究 | 第53-63页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1 细胞系 | 第53页 |
| 1.2 载体 | 第53页 |
| 1.3 组织样本及芯片 | 第53页 |
| 1.4 主要试剂 | 第53-54页 |
| 2 方法 | 第54-57页 |
| 2.1 NFIB在结直肠癌细胞及组织中的表达检测 | 第54-56页 |
| 2.2 NFIB在结直肠癌细胞转移中的作用 | 第56页 |
| 2.3 Rescue实验验证miR-302a是否通过靶向NFIB参与结直肠癌转移 | 第56页 |
| 2.4 miR-302a/NFIB抑制结直肠癌转移的下游机制 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-61页 |
| 3.1 NFIB在结直肠癌细胞及组织中表达升高 | 第57-58页 |
| 3.2 NFIB可促进结直肠癌细胞的体外迁移及侵袭 | 第58页 |
| 3.3 NFIB是miR-302a抑制结直肠癌转移的功能靶基因 | 第58-59页 |
| 3.4 miR-302a/NFIB/ITGA6抑制结直肠癌转移 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第五部分 miR-302a调控结直肠癌西妥昔单抗及奥沙利铂耐药的机制研究 | 第63-72页 |
| 1 材料 | 第63-65页 |
| 1.1 细胞系 | 第63页 |
| 1.2 载体 | 第63页 |
| 1.3 组织样本及芯片 | 第63页 |
| 1.4 主要试剂 | 第63-65页 |
| 2 方法 | 第65-66页 |
| 2.1 CD44在结直肠癌细胞及组织中的表达检测 | 第65页 |
| 2.2 CD44在结直肠癌细胞西妥昔单抗耐药中的作用 | 第65页 |
| 2.3 miR-302a/CD44抑制结直肠癌西妥昔单抗耐药的下游机制 | 第65-66页 |
| 2.4 WesternBlot检测Wnt/β-catenin通路蛋白及P-gp蛋白表达 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-69页 |
| 3.1 CD44在结直肠癌细胞及组织中表达升高 | 第66页 |
| 3.2 CD44可促进结直肠癌西妥昔单抗耐药 | 第66-67页 |
| 3.3 miR-302a/CD44/EGFR抑制结直肠癌西妥昔单抗耐药 | 第67-68页 |
| 3.4 miR-302a可抑制Wnt/β-catenin通路蛋白的表达 | 第68-69页 |
| 3.5 miR-302a可抑制多药耐药蛋白P-gp的表达 | 第69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 个人简历和研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
