| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第13-32页 |
| 1.1 蛋白质翻译后修饰具有重要的生物学功能 | 第13-15页 |
| 1.1.1 蛋白质翻译后修饰简介 | 第13-14页 |
| 1.1.2 蛋白质翻译后修饰研究的关键问题 | 第14-15页 |
| 1.2 化学生物学方法合成具有翻译后修饰的蛋白质 | 第15-21页 |
| 1.2.1 化学合成蛋白质发展史 | 第15-16页 |
| 1.2.2 翻译后修饰蛋白质制备的常见方法 | 第16-19页 |
| 1.2.3 自然化学连接反应 | 第19页 |
| 1.2.4 表达蛋白连接 | 第19-21页 |
| 1.3 Ras蛋白质翻译后修饰简介 | 第21-29页 |
| 1.3.1 Ras蛋白是细胞内重要的分子开关 | 第21-23页 |
| 1.3.2 Ras蛋白质的翻译后修饰与其空间调控的关系 | 第23-24页 |
| 1.3.3 Ras蛋白翻译后修饰研究现状及瓶颈 | 第24-28页 |
| 1.3.4 Rheb蛋白质的翻译后修饰 | 第28-29页 |
| 1.4 科学问题的提出 | 第29-30页 |
| 1.5 本论文研究的主要内容 | 第30-32页 |
| 第2章 具有多重翻译后修饰K-Ras4B全长蛋白质的制备 | 第32-65页 |
| 2.1 本章引言 | 第32-34页 |
| 2.1.1 蛋白质翻译后修饰调控K-Ras4B蛋白活性 | 第32-33页 |
| 2.1.2 化学生物学方法合成翻译后修饰蛋白质具有高效性 | 第33页 |
| 2.1.3 具有法尼基化、甲基化及磷酸化修饰K-Ras4B制备面临的问题 | 第33页 |
| 2.1.4 本章问题的提出和拟展开内容 | 第33-34页 |
| 2.2 实验部分 | 第34-46页 |
| 2.2.1 实验原理 | 第34-37页 |
| 2.2.2 具有多重修饰K-Ras4B多肽合成设计 | 第37-40页 |
| 2.2.3 具有多重修饰K-Ras4B多肽的分离纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.4 具有多重修饰K-Ras4B多肽的表征 | 第41页 |
| 2.2.5 K-Ras4B质粒构建以及C-末端硫酯蛋白的表达和标记 | 第41-43页 |
| 2.2.6 K-Ras4B硫酯蛋白与C-末端多肽的自然化学连接反应 | 第43页 |
| 2.2.7 具有多重修饰的K-Ras4B全长蛋白的分离纯化 | 第43-44页 |
| 2.2.8 具有多重修饰的K-Ras4B全长蛋白鸟苷酸交换 | 第44-45页 |
| 2.2.9 具有多重修饰K-Ras4B全长蛋白质的表征 | 第45页 |
| 2.2.10 试剂和仪器 | 第45-46页 |
| 2.3 实验结果和讨论 | 第46-63页 |
| 2.3.1 Fmoc-Cys-OMe结构单元的结果分析 | 第46-47页 |
| 2.3.2 具有多重修饰K-Ras4B多肽结果分析 | 第47-59页 |
| 2.3.3 具有多重修饰K-Ras4B全长蛋白结果分析 | 第59-63页 |
| 2.4 本章小结 | 第63-65页 |
| 第3章 磷酸化修饰对于K-Ras4B在细胞内转运影响的体外研究 | 第65-87页 |
| 3.1 本章引言 | 第65-67页 |
| 3.1.1 K-Ras4B蛋白与细胞膜结合是一个动态的过程 | 第65页 |
| 3.1.2 181位磷酸化参与K-Ras4B在细胞膜上动态调节研究存在争议 | 第65-66页 |
| 3.1.3 PDEδ具有稳定K-Ras4B在细胞质中的重要作用 | 第66-67页 |
| 3.1.4 本章问题的提出和拟展开内容 | 第67页 |
| 3.2 实验部分 | 第67-76页 |
| 3.2.0 实验原理 | 第67-71页 |
| 3.2.1 PDEδ的表达和制备 | 第71页 |
| 3.2.2 脂质体的制备 | 第71-72页 |
| 3.2.3 半定量法实验 | 第72-73页 |
| 3.2.4 荧光极化实验 | 第73页 |
| 3.2.5 SPR实验 | 第73-75页 |
| 3.2.6 频-域荧光偏振(FDFA) | 第75页 |
| 3.2.7 ITC实验 | 第75页 |
| 3.2.8 IRRA实验 | 第75-76页 |
| 3.2.9 试剂和仪器 | 第76页 |
| 3.3 实验结果和讨论 | 第76-85页 |
| 3.3.1 PDEδ和蛋白质表达与纯化 | 第76-78页 |
| 3.3.2 人工脂质体表征 | 第78-79页 |
| 3.3.3 K-Ras4B与脂质体膜之间作用力的检测 | 第79-81页 |
| 3.3.4 IRRA实验检测磷酸化影响K-Ras4B与细胞膜作用力 | 第81-83页 |
| 3.3.5 K-Ras4B与PDEδ作用力检测 | 第83-85页 |
| 3.4 本章小结 | 第85-87页 |
| 第4章 磷酸化修饰对K-Ras4B蛋白在细胞内分布的影响 | 第87-101页 |
| 4.1 本章引言 | 第87-89页 |
| 4.1.1 细胞模型构建是研究K-Ras4B磷酸化修饰有力补充 | 第87-89页 |
| 4.1.2 本章问题的提出和拟展开内容 | 第89页 |
| 4.2 实验部分 | 第89-92页 |
| 4.2.1 实验原理 | 第89-91页 |
| 4.2.2 磷酸化(P-C)修饰的K-Ras4B全长蛋白的合成 | 第91页 |
| 4.2.3 MDCK细胞的培养以及芘丁酸介导的蛋白质转运 | 第91页 |
| 4.2.4 激光共聚焦探究K-Ras4B在细胞内分布 | 第91-92页 |
| 4.2.5 试剂和仪器 | 第92页 |
| 4.3 实验结果和讨论 | 第92-99页 |
| 4.3.1 含磷碳键K-Ras4B多肽的合成和表征 | 第92-96页 |
| 4.3.2 含磷碳键K-Ras4B蛋白质的NCL反应和表征 | 第96-97页 |
| 4.3.3 激光共聚焦探究磷酸化修饰K-Ras4B在细胞内分布 | 第97-99页 |
| 4.4 本章小结 | 第99-101页 |
| 第5章 磷酸化修饰对于K-Ras4B在膜上分布以及对膜热力学性质的影响探究 | 第101-116页 |
| 5.1 本章引言 | 第101-104页 |
| 5.1.1 K-Ras4B在细胞膜上聚集形成团簇 | 第101-103页 |
| 5.1.2 本章问题的提出和拟展开内容 | 第103-104页 |
| 5.2 实验部分 | 第104-109页 |
| 5.2.1 实验原理 | 第104-105页 |
| 5.2.2 动态光散射测量液相下的K-Ras4B蛋白的水合半径 | 第105-106页 |
| 5.2.3 磷酸化K-Ras4B与膜结合后蛋白质二级结构的变化 | 第106页 |
| 5.2.4 荧光泄露实验检测K-Ras4B对于细胞膜稳定性的影响.. | 第106页 |
| 5.2.5 原子力显微镜探究磷酸化对于K-Ras4B在膜上分布的影响 | 第106-107页 |
| 5.2.6 DSC实验探究磷酸化对于K-Ras4B与膜结合形式的影响 | 第107-108页 |
| 5.2.7 探究磷酸化修饰K-Ras4B对于膜流动性的影响 | 第108页 |
| 5.2.8 试剂与仪器 | 第108-109页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第109-115页 |
| 5.3.1 DLS实验结果 | 第109页 |
| 5.3.2 荧光泄露实验结果 | 第109-110页 |
| 5.3.3 K-Ras4B蛋白与膜系统结合后的圆二色谱 | 第110-111页 |
| 5.3.4 利用原子力显微镜观察磷酸化对K-Ras4B在细胞膜上分布影响 | 第111-113页 |
| 5.3.5 K-Ras4B多肽与蛋白质与膜结合的DSC实验结果 | 第113-114页 |
| 5.3.6 K-Ras4B多肽与蛋白质对于膜系统流动性的影响结果. | 第114-115页 |
| 5.4 本章小结 | 第115-116页 |
| 第6章 Rheb蛋白泛素化的鉴定及泛素化修饰Rheb蛋白合成方法探究 | 第116-139页 |
| 6.1 本章引言 | 第116-118页 |
| 6.1.1 Rheb调节mTOR信号通路 | 第116-117页 |
| 6.1.2 泛素化修饰调节Ras蛋白功能研究不够全面 | 第117-118页 |
| 6.1.3 本章问题的提出和拟展开内容 | 第118页 |
| 6.2 实验部分 | 第118-127页 |
| 6.2.1 实验原理 | 第118-122页 |
| 6.2.2 Rheb泛素化鉴定的流程 | 第122-123页 |
| 6.2.3 三段法合成151位泛素化的Rheb蛋白复合物 | 第123-124页 |
| 6.2.4 利用Thiol-ene反应合成具有泛素化修饰的Rheb蛋白复合物 | 第124-126页 |
| 6.2.5 引入非天然氨基酸合成具有泛素化修饰的Rheb蛋白复合物 | 第126-127页 |
| 6.3 实验结果与讨论 | 第127-138页 |
| 6.3.1 Rheb泛素化的鉴定 | 第127-128页 |
| 6.3.2 三段法合成泛素化Rheb蛋白 | 第128-133页 |
| 6.3.3 Thiol-ene方法合成泛素化Rheb蛋白 | 第133-135页 |
| 6.3.4 非天然氨基酸合成泛素化Rheb蛋白 | 第135-138页 |
| 6.4 本章小结 | 第138-139页 |
| 第7章 结论与展望 | 第139-141页 |
| 7.1 主要结论 | 第139页 |
| 7.2 展望 | 第139-141页 |
| 参考文献 | 第141-152页 |
| 致谢 | 第152-154页 |
| 附录A 多肽和蛋白质编号含义解释 | 第154-155页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第155页 |
