| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1.1 有机磷酸酯类化合物 | 第13-16页 |
| 1.1.1 有机磷酸酯农药 | 第13-15页 |
| 1.1.2 有机磷神经毒剂 | 第15页 |
| 1.1.3 有机磷酸酯毒性机制 | 第15-16页 |
| 1.2 有机磷酸酯生物降解 | 第16-21页 |
| 1.2.1 有机磷酸酯降解菌 | 第16-18页 |
| 1.2.2 有机磷酸酯水解酶 | 第18-20页 |
| 1.2.3 有机磷神经毒剂降解 | 第20-21页 |
| 1.3 有机磷水解酶蛋白质工程 | 第21-27页 |
| 1.3.1 有机磷水解酶晶体结构 | 第21-26页 |
| 1.3.2 有机磷水解酶蛋白质工程 | 第26-27页 |
| 1.4 有机磷水解酶催化机制 | 第27-30页 |
| 1.4.1 OPH催化机制 | 第27-28页 |
| 1.4.2 其它有机磷水解酶催化机制 | 第28-30页 |
| 1.5 有机磷降解新型催化体系 | 第30-34页 |
| 1.5.1 非酶催化剂作用机制 | 第30-32页 |
| 1.5.2 碱性磷酸酯酶介质优化 | 第32-34页 |
| 1.6 研究意义和目的 | 第34-35页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第34页 |
| 1.6.2 研究目的 | 第34-35页 |
| 第二章 有机磷水解酶和甲基对硫磷水解酶基因的克隆表达 | 第35-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第35页 |
| 2.1.2 生化试剂和酶 | 第35-36页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第36页 |
| 2.1.4 分析软件 | 第36页 |
| 2.1.5 常用缓冲液及配置 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 2.2.1 有机磷水解酶基因的克隆 | 第37-38页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.3 重组有机磷水解酶原核表达 | 第39页 |
| 2.2.4 重组有机磷水解酶的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.5 同源模建 | 第40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-46页 |
| 2.3.1 有机磷水解酶oph和mpd基因克隆及鉴定 | 第40-43页 |
| 2.3.2 重组有机磷水解酶OPH和MPD的原核表达与条件优化 | 第43-44页 |
| 2.3.3 重组OPH和MPD的高级结构同源模建分析 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第46-47页 |
| 第三章 定点突变构建高效降解DFP的重组有机磷水解酶 | 第47-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第47页 |
| 3.1.2 酶和试剂 | 第47-48页 |
| 3.1.3 仪器及分析软件 | 第48页 |
| 3.1.4 缓冲液及相关试剂配置 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-55页 |
| 3.2.1 同源模建和分子对接 | 第48页 |
| 3.2.2 突变体引物 | 第48-49页 |
| 3.2.3 突变体构建方法 | 第49-53页 |
| 3.2.4 重组突变体酶原核表达 | 第53页 |
| 3.2.5 重组突变体酶的制备 | 第53页 |
| 3.2.6 蛋白质浓度测定方法 | 第53-54页 |
| 3.2.7 MP水解酶活测定 | 第54页 |
| 3.2.8 DFP水解酶活测定 | 第54-55页 |
| 3.3 结果与分析 | 第55-65页 |
| 3.3.1 OPH催化结构特征及突变体设计 | 第55-57页 |
| 3.3.2 重组突变体的构建及鉴定 | 第57-60页 |
| 3.3.3 化学合成DFP的化学表征 | 第60-63页 |
| 3.3.4 重组OPHm/MPDm酶活性分析 | 第63-65页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第65-66页 |
| 第四章 乙醇胺增效有机磷水解酶动力学及机制研究 | 第66-85页 |
| 4.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第66页 |
| 4.1.2 酶和试剂 | 第66页 |
| 4.1.3 仪器及软件 | 第66页 |
| 4.1.4 缓冲液及相关试剂配置 | 第66-67页 |
| 4.2 实验方法 | 第67-69页 |
| 4.2.1 重组酶的制备 | 第67页 |
| 4.2.2 重组蛋白亲和纯化 | 第67页 |
| 4.2.3 酶活性检测 | 第67-68页 |
| 4.2.4 动力学分析 | 第68-69页 |
| 4.3 结果与分析 | 第69-82页 |
| 4.3.1 重组OPH和MPD的分离纯化 | 第69-70页 |
| 4.3.2 乙醇胺类对重组OPH水解DFP增效动力学分析 | 第70-75页 |
| 4.3.3 胺类或醇类对重组OPH水解DFP的影响 | 第75-77页 |
| 4.3.4 氟离子抑制动力学分析 | 第77-79页 |
| 4.3.5 乙醇胺类对OPH水解MP/PO的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.6 三乙醇胺对OPH/MPD突变体水解DFP的影响 | 第80-82页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第82-85页 |
| 第五章 总结与展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-101页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第101-102页 |
| 衷心感谢以下基金资助 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
