| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 黄花棘豆研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.1 黄花棘豆的分布与危害 | 第12页 |
| 1.1.2 黄花棘豆化感作用研究 | 第12-13页 |
| 1.1.3 黄花棘豆的毒性成分及中毒机理研究 | 第13页 |
| 1.1.4 黄花棘豆在医学中的应用价值 | 第13页 |
| 1.2 LEA蛋白的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 LEA蛋白的分类 | 第13-15页 |
| 1.2.2 LEA蛋白与细胞抗逆功能的关系 | 第15-16页 |
| 1.2.3 LEA3蛋白的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 本课题组在黄花棘豆方面的相关研究 | 第18页 |
| 1.4 研究目的意义 | 第18-19页 |
| 1.5 研究内容与技术路线 | 第19-22页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 黄花棘豆LEA3基因的克隆及序列分析 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料与菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 相关试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 相关仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 各种溶液及培养基的配制 | 第23-24页 |
| 2.2.2 PCR引物设计 | 第24页 |
| 2.2.3 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2.4 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.5 cDNA第一链合成 | 第26页 |
| 2.2.6 PCR反应 | 第26-27页 |
| 2.2.7 目的片段回收 | 第27页 |
| 2.2.8 回收产物与克隆载体的连接 | 第27页 |
| 2.2.9 大肠杆菌(JM109)感受态的制备—CaCl_2法 | 第27-28页 |
| 2.2.10 反应产物转化大肠杆菌(蓝白斑筛选) | 第28页 |
| 2.2.11 菌落PCR | 第28页 |
| 2.2.12 质粒提取与酶切验证 | 第28-29页 |
| 2.2.13 OoLEA3基因序列分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-38页 |
| 2.3.1 植物组织总RNA样品质量检测 | 第30页 |
| 2.3.2 目的基因片段的筛选与克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.3 OoLEA3基因生物信息学分析 | 第31-35页 |
| 2.3.4 OoLEA3蛋白分子进化与系统进化分析 | 第35-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 黄花棘豆LEA3基因在非生物胁迫与激素处理下的表达谱分析 | 第40-46页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第40页 |
| 3.1.1 材料 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 3.1.3 实验仪器与设备 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 qRT-PCR引物设计 | 第40-41页 |
| 3.2.2 RNA的提取与的cDNA第一链合成 | 第41页 |
| 3.2.3 qRT-PCR | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 3.3.1 OoLEA3基因的熔解曲线分析 | 第42页 |
| 3.3.2 非生物胁迫下OoLEA3基因表达模式分析 | 第42-43页 |
| 3.3.3 OoLEA3基因激素诱导下的表达模式分析 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 黄花棘豆LEA3蛋白在提高重组菌抗渗透胁迫中的作用 | 第46-62页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第46-47页 |
| 4.1.1 材料 | 第46页 |
| 4.1.2 试剂 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 引物合成 | 第47页 |
| 4.2.2 OoLEA3基因在细菌中的功能分析 | 第47-49页 |
| 4.2.3 OoLEA3基因在酵母中的功能分析 | 第49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-59页 |
| 4.3.1 OoLEA3蛋白细菌抗渗透胁迫中的功能分析 | 第49-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-62页 |
| 第五章 黄花棘豆LEA3基因功能分析 | 第62-70页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第62-63页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第62页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第62-63页 |
| 5.1.3 实验仪器与设备 | 第63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-65页 |
| 5.2.1 OoLEA3基因转化拟南芥植株 | 第63-64页 |
| 5.2.2 转基因拟南芥DNA提取(改良CTAB法) | 第64-65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-68页 |
| 5.3.1 转基因OoLEA3拟南芥T3代重合体的获得 | 第65-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-70页 |
| 结论与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间获得的科研成果 | 第84-85页 |
