| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 小麦蛋白介绍 | 第12-13页 |
| 1.3 麦谷蛋白结构的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.3.1 HMW-GS的结构特征 | 第13-15页 |
| 1.3.21Dx5-N的结构特点及其功能性质 | 第15页 |
| 1.3.3 麦谷蛋白亚基间相互作用的聚合模型 | 第15-18页 |
| 1.4 重组蛋白表达系统和柱层析技术介绍 | 第18-20页 |
| 1.4.1 重组蛋白表达系统 | 第18-19页 |
| 1.4.2 柱层析分离纯化技术 | 第19-20页 |
| 1.5 蛋白质聚集体结构的表征方法 | 第20页 |
| 1.6 环境因素对蛋白质聚集行为的影响 | 第20-22页 |
| 1.6.1 pH的影响 | 第21页 |
| 1.6.2 离子强度的影响 | 第21页 |
| 1.6.3 十二烷基磺酸钠（SDS）、尿素和二硫苏糖醇（DTT）的影响 | 第21-22页 |
| 1.7 本论文的研究意义及主要研究内容 | 第22-24页 |
| 1.7.1 研究意义 | 第22页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第22-23页 |
| 1.7.3 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 1Dx5-N的克隆、原核表达及分离纯化 | 第24-44页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第24-28页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2.4 常用试剂及溶液的配制 | 第26-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.3.1 1Dx5-N原核表达载体的构建 | 第28-32页 |
| 2.3.2 目的蛋白的表达 | 第32-33页 |
| 2.3.3 培养放大及重组蛋白的纯化 | 第33-36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-42页 |
| 2.4.1 重组表达载体的构建 | 第36页 |
| 2.4.2 重组 1Dx5-N的原核表达 | 第36-38页 |
| 2.4.3 重组蛋白原核表达条件的优化 | 第38-39页 |
| 2.4.4 重组 1Dx5-N的可溶性分析 | 第39-40页 |
| 2.4.5 重组 1Dx5-N的亲和层析纯化 | 第40-42页 |
| 2.4.6 凝胶过滤层析分析重组 1Dx5-N的组分均一性 | 第42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 第三章 1Dx5-N溶液结构与聚集行为分析 | 第44-64页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-46页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第45页 |
| 3.2.3 巯基含量测定所用溶液的配制 | 第45-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-49页 |
| 3.3.1 样品的制备 | 第46页 |
| 3.3.2 标签对 1Dx5-N结构的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.3 标签对 1Dx5-N聚集体形成的影响 | 第47页 |
| 3.3.4 1Dx5-N聚集体形成的驱动力分析 | 第47-48页 |
| 3.3.5 放置时间对 1Dx5-N的聚集态的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第49-62页 |
| 3.4.1 重组蛋白的表达标签切除和 1Dx5-N的纯化 | 第49-52页 |
| 3.4.2 标签切除后 1Dx5-N结构的变化 | 第52-53页 |
| 3.4.3 表达标签对重组蛋白聚集行为的影响 | 第53页 |
| 3.4.4 1Dx5-N聚集体形成的驱动力分析 | 第53-60页 |
| 3.4.5 放置时间对 1Dx5-N聚集行为的影响 | 第60-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 不同pH值下 1Dx5-N聚集行为的变化 | 第64-76页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 实验材料 | 第64-65页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第64-65页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-67页 |
| 4.3.1 等电点测定 | 第65页 |
| 4.3.2 AFM观测 | 第65-66页 |
| 4.3.3 CD光谱分析 | 第66页 |
| 4.3.4 内源荧光光谱分析 | 第66页 |
| 4.3.5 同步荧光光谱分析 | 第66页 |
| 4.3.6 游离巯基含量分析 | 第66页 |
| 4.3.7 非还原SDS-PAGE | 第66-67页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第67-75页 |
| 4.4.1 等电点测定 | 第67-69页 |
| 4.4.2 pH值对 1Dx5-N聚集行为的影响 | 第69页 |
| 4.4.3 pH值对 1Dx5-N结构的影响 | 第69-73页 |
| 4.4.4 pH值对 1Dx5-N内部二硫键的影响 | 第73-75页 |
| 4.5 本章小结 | 第75-76页 |
| 第五章 NaCl浓度对重组 1Dx5-N聚集行为及其结构的影响 | 第76-84页 |
| 5.1 引言 | 第76页 |
| 5.2 实验材料 | 第76-77页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第76-77页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第77页 |
| 5.3 实验方法 | 第77-78页 |
| 5.3.1 样品的制备 | 第77页 |
| 5.3.2 SEC分析 | 第77-78页 |
| 5.3.3 CD光谱分析 | 第78页 |
| 5.3.4 表面电位测定 | 第78页 |
| 5.3.5 内源荧光光谱分析 | 第78页 |
| 5.3.6 外源荧光光谱分析 | 第78页 |
| 5.3.7 非还原SDS-PAGE | 第78页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第78-83页 |
| 5.4.1 NaCl浓度对重组 1Dx5-N聚集行为的影响 | 第78-79页 |
| 5.4.2 NaCl浓度对 1Dx5-N结构的影响 | 第79-82页 |
| 5.4.3 NaCl浓度对 1Dx5-N分子间二硫键形成的影响 | 第82-83页 |
| 5.5 本章小结 | 第83-84页 |
| 结论与展望 | 第84-86页 |
| 一 结论 | 第84-85页 |
| 二 创新点 | 第85页 |
| 三 展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附件 | 第96页 |
