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3D培养及原位癌对乳腺癌及大肠癌细胞基因组甲基化及表观可塑性的影响

中文摘要第4-7页
abstract第7-10页
第1章 绪论第16-38页
    1.1 3D培养进展概述第16-20页
    1.2 3D培养对肿瘤细胞生物学行为的影响第20-25页
        1.2.1 3D培养模型能更好的模拟真实的肿瘤微环境第20-22页
        1.2.2 3D培养体系中肿瘤细胞转移采用了更复杂的模式第22页
        1.2.3 3D培养改变肿瘤细胞基因表达谱,使其适应外环境的改变第22-23页
        1.2.4 3D培养更真实的模拟肿瘤组织内的细胞相互作用第23-25页
    1.3 表观基因组学与肿瘤发生、发展的关系第25-34页
        1.3.1 DNA甲基化是一种普遍存在的重要表观遗传学调控机制第26页
        1.3.2 组蛋白修饰的调控机制第26页
        1.3.3 细胞与微环境紧密联系是表观遗传学调控的基础第26-27页
        1.3.4 癌症不仅仅是基因异常疾病,也是一种表观遗传学异常性疾病第27-34页
    1.4 3D培养是筛选肿瘤细胞药物敏感性的良好工具第34-35页
    1.5 立题依据及研究意义第35-37页
    1.6 技术路线第37-38页
第2章 实验材料与实验方法第38-56页
    2.1 实验材料第38-40页
        2.1.1 实验仪器第38-39页
        2.1.2 实验试剂第39-40页
        2.1.3 细胞系及实验动物第40页
    2.2 实验方法第40-56页
        2.2.1 2D细胞培养第40-41页
        2.2.2 3D on-top细胞培养及提取第41页
        2.2.3 免疫荧光实验(Immunofluorescence)第41-42页
        2.2.4 构建SCID小鼠乳腺及大肠癌原位癌模型第42页
        2.2.5 小鼠活体荧光成像第42-43页
        2.2.6 DNA提取(Biomiga公司EZgeneTM Tissue gDNA Miniprep Kit GD2211)第43页
        2.2.7 RNA提取第43-44页
        2.2.8 逆转录获取cDNA第44-45页
        2.2.9 甲基化特异性FQ-PCR(定量MSP)检测肿瘤特异性甲基化第45-47页
        2.2.10 RT-PCR检测受甲基化调控的基因的表达及干细胞相关基因表达水平第47-49页
        2.2.11 Western Blot第49页
        2.2.12 流式细胞术分析2D、3D培养模型中干细胞的比例第49-50页
        2.2.13 Illuminum Infinium Human Methylation 450K Bead Chip检测全基因组甲基化第50-54页
        2.2.14 数据统计分析第54-56页
第3章 实验结果第56-78页
    3.1 在3D on-top培养下,肿瘤细胞细胞球呈现独特外形第56-60页
    3.2 3D培养模型中细胞增殖指数降低第60-61页
    3.3 成功构建原位乳腺癌模型及原位大肠癌模型第61-64页
    3.4 3D培养细胞及原位癌中,关键致癌基因的甲基化没有变化第64-66页
    3.5 3D培养可以影响与干细胞分化相关基因SOX2的转录水平第66-67页
    3.6 短时间的3D培养并不能增加肿瘤干细胞的比例第67-68页
    3.7 2D培养细胞、3D培养细胞、原位癌中基因组甲基化谱有很大的差异第68-72页
    3.8 3D培养细胞与原位癌细胞甲基化变异谱更为类似第72-74页
    3.9 乳腺癌和结肠癌细胞进行3D培养后,改变的甲基化谱不同第74页
    3.10 乳腺癌和结肠癌细胞进行原位癌培养后,改变的甲基化谱有很多相同之处第74-75页
    3.11 3D培养细胞及原位癌中有多个耐药基因转录水平明显提高第75-76页
    3.12 DLD-13D培养模型中N-cadherin和Vimentin表达水平明显高于2D模型第76-78页
第4章 讨论第78-82页
第5章 结论第82-84页
参考文献第84-94页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第94-95页
致谢第95页

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