| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第13-32页 |
| 1.1 植物卵菌病害 | 第13-18页 |
| 1.1.1 卵菌简介 | 第13-15页 |
| 1.1.2 卵菌的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.3 卵菌引起的植物病害 | 第16-18页 |
| 1.2 葡萄霜霉病 | 第18-22页 |
| 1.2.1 葡萄霜霉菌概况 | 第18-19页 |
| 1.2.2 葡萄霜霉病的起源和危害 | 第19-20页 |
| 1.2.3 葡萄霜霉病的防治 | 第20-21页 |
| 1.2.4 葡萄抗病育种 | 第21-22页 |
| 1.3 植物—病原物互作的分子机制 | 第22-29页 |
| 1.3.1 植物先天免疫 | 第23-25页 |
| 1.3.2 病原菌效应蛋白调节植物先天免疫 | 第25-27页 |
| 1.3.3 卵菌效应蛋白的特点和作用机制 | 第27-29页 |
| 1.4 葡萄霜霉菌RXLR效应蛋白研究进展 | 第29-30页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 RXLR效应蛋白基因克隆及序列分析 | 第32-44页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.2.1 植物材料及菌株 | 第32页 |
| 2.2.2 质粒载体 | 第32页 |
| 2.2.3 药品和试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-36页 |
| 2.3.1 植物材料培养 | 第33页 |
| 2.3.2 葡萄霜霉菌培养 | 第33-34页 |
| 2.3.3 核酸提取 | 第34-35页 |
| 2.3.4 基因克隆 | 第35-36页 |
| 2.3.5 反转录PCR (RT-PCR) | 第36页 |
| 2.3.6 生物信息学分析 | 第36页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.4.1 基因组DNA质量分析 | 第36-37页 |
| 2.4.2 RXLR效应蛋白基因扩增 | 第37-38页 |
| 2.4.3 效应蛋白基因表达验证 | 第38页 |
| 2.4.4 效应蛋白同源性分析 | 第38-40页 |
| 2.4.5 效应蛋白系统发育分析 | 第40-41页 |
| 2.4.6 效应蛋白亚细胞定位预测 | 第41-42页 |
| 2.5 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 效应蛋白亚细胞定位分析 | 第44-60页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.2.1 植物材料及菌株 | 第45页 |
| 3.2.2 质粒载体 | 第45页 |
| 3.2.3 药品和试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-51页 |
| 3.3.1 生物信息学分析 | 第46页 |
| 3.3.2 植物材料培养 | 第46-47页 |
| 3.3.3 植物表达载体构建 | 第47页 |
| 3.3.4 农杆菌电击感受态制备 | 第47-48页 |
| 3.3.5 农杆菌电击转化 | 第48页 |
| 3.3.6 亚细胞定位 | 第48页 |
| 3.3.7 叶绿体分离 | 第48-49页 |
| 3.3.8 蛋白提取 | 第49页 |
| 3.3.9 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第49-50页 |
| 3.3.10 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第50页 |
| 3.3.11 拟南芥转基因 | 第50-51页 |
| 3.4 实验结果 | 第51-58页 |
| 3.4.1 效应蛋白主要定位于植物细胞核 | 第51-52页 |
| 3.4.2 效应蛋白存在不规则的亚核分布 | 第52-53页 |
| 3.4.3 效应蛋白定位于植物膜系统 | 第53-55页 |
| 3.4.4 效应蛋白定位于植物叶绿体 | 第55-57页 |
| 3.4.5 转基因验证亚细胞定位 | 第57-58页 |
| 3.5 讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 叶绿体定位效应蛋白PvRXLR54抑制植物先天免疫 | 第60-81页 |
| 4.1 引言 | 第60-61页 |
| 4.2 实验材料 | 第61-63页 |
| 4.2.1 植物材料及菌株 | 第61页 |
| 4.2.2 质粒载体 | 第61页 |
| 4.2.3 试剂和耗材 | 第61-63页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-69页 |
| 4.3.1. 群体遗传分析 | 第63页 |
| 4.3.2 基因表达模式分析 | 第63-64页 |
| 4.3.3 信号肽诱捕载体构建 | 第64-65页 |
| 4.3.4 一步法转化酵母 | 第65页 |
| 4.3.5 信号肽功能验证 | 第65页 |
| 4.3.6 共定位分析 | 第65-66页 |
| 4.3.7 超速离心 | 第66-67页 |
| 4.3.8 原生质体瞬时表达 | 第67页 |
| 4.3.9 植物转基因 | 第67页 |
| 4.3.10 PCD抑制检测 | 第67-68页 |
| 4.3.11 疫霉菌接种 | 第68页 |
| 4.3.12 细菌生长指数分析 | 第68页 |
| 4.3.13 胼胝质染色 | 第68-69页 |
| 4.3.14 活性氧测定 | 第69页 |
| 4.3.15 叶绿素含量及光化学效率测定 | 第69页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第69-79页 |
| 4.4.1 PvRXLR54是一个保守的效应蛋白基因 | 第69-70页 |
| 4.4.2 PvRXLR54基因受到诱导表达 | 第70-71页 |
| 4.4.3 PvRXLR54是一个分泌蛋白 | 第71-72页 |
| 4.4.4 PvRXLR54双向定位于叶绿体和线粒体 | 第72-73页 |
| 4.4.5 PvRXLR54在植物体内的转运机制分析 | 第73-74页 |
| 4.4.6 PvRXLR54能够抑制激发子引起的烟草细胞程序性坏死 | 第74-75页 |
| 4.4.7 PvRXLR54干扰植物叶绿素的积累 | 第75-76页 |
| 4.4.8 PvRXLR54抑制植物光化学反应 | 第76-77页 |
| 4.4.9 PvRXLR54抑制植物先天免疫 | 第77-79页 |
| 4.5 讨论 | 第79-81页 |
| 第五章 效应蛋白PvRXLR54与叶绿素结合蛋白互作 | 第81-100页 |
| 5.1 引言 | 第81-82页 |
| 5.2 实验材料 | 第82-83页 |
| 5.2.1 植物材料及菌株 | 第82页 |
| 5.2.2 质粒载体 | 第82页 |
| 5.2.3 试剂和耗材 | 第82-83页 |
| 5.2.4 主要仪器 | 第83页 |
| 5.3 实验方法 | 第83-89页 |
| 5.3.1 酵母文库构建 | 第83页 |
| 5.3.2 酵母双杂诱饵载体构建 | 第83-84页 |
| 5.3.3 诱饵蛋白自激活检测 | 第84页 |
| 5.3.4 杂交文库筛选 | 第84-85页 |
| 5.3.5 候选互作蛋白验证 | 第85页 |
| 5.3.6 原核表达载体构建 | 第85页 |
| 5.3.7 蛋白原核表达及纯化 | 第85-86页 |
| 5.3.8 叶绿体蛋白大量提取 | 第86页 |
| 5.3.9 亲和层析 | 第86-87页 |
| 5.3.10 免疫沉淀 | 第87页 |
| 5.3.11 蛋白银染 | 第87-88页 |
| 5.3.12 质谱分析 | 第88页 |
| 5.3.13 GST Pull-down | 第88页 |
| 5.3.14 基因沉默 | 第88-89页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第89-98页 |
| 5.4.1 PvRXLR54不具有自激活活性 | 第89页 |
| 5.4.2 酵母双杂筛选到27个候选互作蛋白 | 第89-91页 |
| 5.4.3 三个互作蛋白是假阳性 | 第91-92页 |
| 5.4.5 共沉淀鉴定到42个叶绿体蛋白 | 第92-95页 |
| 5.4.6 PvRXLR54和一个叶绿素结合蛋白(VvCBP1)互作 | 第95-97页 |
| 5.4.8 VvCBP151是一个重要的类囊体蛋白 | 第97-98页 |
| 5.5 讨论 | 第98-100页 |
| 第六章 结论与展望 | 第100-102页 |
| 6.1 主要结论 | 第100页 |
| 6.2 本研究的创新点 | 第100页 |
| 6.3 工作展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 附录 | 第114-150页 |
| 个人简介 | 第150页 |
