| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 CD4~+ T细胞在器官移植中的研究背景与意义 | 第10-11页 |
| 1.2 MicroRNA与免疫细胞能量代谢的研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1 MicroRNA与CD4~+ T细胞在移植免疫中的重要联系 | 第11-12页 |
| 1.2.2 MicroRNA对细胞能量代谢的作用 | 第12-13页 |
| 1.2.3 细胞能量代谢与CD4~+ T细胞活化、分化及功能的相关性 | 第13-14页 |
| 1.2.4 总结 | 第14-15页 |
| 1.3 本文的主要工作 | 第15页 |
| 1.4 本论文的结构安排 | 第15-17页 |
| 第二章 同种异体免疫miR-449a与CD4~+ T细胞功能的相关性研究 | 第17-21页 |
| 2.1 MiR-449a在小鼠同种异体心脏移植后的表达研究 | 第17-19页 |
| 2.1.1 实验动物与分组方法 | 第17页 |
| 2.1.2 小鼠心脏移植模型的构建方法 | 第17页 |
| 2.1.3 移植物样本的细胞提纯及miR-449a表达水平的检测方法 | 第17-18页 |
| 2.1.4 MiR-449a在外周血单核细胞的表达变化 | 第18页 |
| 2.1.5 MiR-449a在移植物浸润淋巴细胞的表达变化 | 第18-19页 |
| 2.2 MiR-449a在CD4~+ T细胞体外活化实验中的表达研究 | 第19-20页 |
| 2.2.1 小鼠CD4~+ T细胞的提取与培养 | 第19页 |
| 2.2.2 MiR-449a在CD4~+ T细胞经抗体刺激后的表达变化 | 第19页 |
| 2.2.3 MiR-449a在混合淋巴反应中的表达变化 | 第19-20页 |
| 2.3 本章小结 | 第20-21页 |
| 第三章 基于Jurkat细胞系研究miR-449a对细胞代谢表型的影响 | 第21-39页 |
| 3.1 Jurkat细胞系的培养 | 第21-22页 |
| 3.2 特异性miR-449a抑制剂的瞬时转染 | 第22-30页 |
| 3.2.1 体外浓度梯度实验与时间梯度实验 | 第24-25页 |
| 3.2.1.1 体外浓度梯度实验与时间梯度实验的分组方式 | 第24页 |
| 3.2.1.2 转染的实验步骤 | 第24-25页 |
| 3.2.2 转染效能的检验 | 第25-30页 |
| 3.2.2.1 RT-PCR的实验步骤 | 第25-28页 |
| 3.2.2.2 RT-PCR的实验结果 | 第28-30页 |
| 3.3 Jurkat细胞系的代谢表型实验 | 第30-38页 |
| 3.3.1 SeahorseXFpanalyzer与细胞表型实验 | 第31-32页 |
| 3.3.2 FCCP梯度实验步骤 | 第32-33页 |
| 3.3.3 SeahorseXFp细胞表型实验步骤 | 第33-34页 |
| 3.3.4 SeahorseXFp细胞表型实验结果 | 第34-38页 |
| 3.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第四章 基于小鼠CD4~+ T细胞研究miR-449a对能量代谢的影响 | 第39-52页 |
| 4.1 小鼠原代CD4~+ T细胞的获得与培养 | 第40-45页 |
| 4.1.1 小鼠原代CD4~+ T细胞的提取与纯化 | 第40-42页 |
| 4.1.2 小鼠原代CD4~+ T细胞的体外活化 | 第42-45页 |
| 4.2 小鼠原代CD4~+ T细胞的活化与转染后代谢表型检测 | 第45-48页 |
| 4.2.1 活化的CD4~+ T细胞的FCCP浓度梯度实验 | 第45-46页 |
| 4.2.2 活化的CD4~+ T细胞的代谢表型实验 | 第46-48页 |
| 4.3 抑制miR-449a表达对CD4~+ T细胞线粒体呼吸的影响 | 第48-50页 |
| 4.4 抑制miR-449a表达对CD4~+ T细胞糖酵解的影响 | 第50-51页 |
| 4.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-54页 |
| 5.1 全文总结 | 第52-53页 |
| 5.2 后续工作展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第61页 |
