| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 综述 | 第10-20页 |
| 2 引言 | 第20-24页 |
| 2.1 Parkin 是一个具有多功能的 E3 泛素连接酶 | 第20页 |
| 2.2 Parkin 结构 | 第20-21页 |
| 2.3 Parkin 的保护作用 | 第21-22页 |
| 2.3.1 线粒体与 FCCP | 第21页 |
| 2.3.2 Parkin 与线粒体：PINK1-Parkin 途径 | 第21-22页 |
| 2.3.3 调节细胞凋亡或者存活通路中的泛素信号通路 | 第22页 |
| 2.4 自噬的基本机制 | 第22-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-40页 |
| 3.1 构建 Parkin 野生型和突变型质粒 | 第24-29页 |
| 3.1.1 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 3.1.2 常用试剂及配制 | 第24-25页 |
| 3.1.3 实验步骤 | 第25-29页 |
| 3.2 Parkin 重组载体的表达与稳定细胞系的建立 | 第29-33页 |
| 3.2.1 主要仪器与设备 | 第29页 |
| 3.2.2 常用试剂及配制 | 第29-31页 |
| 3.2.3 实验步骤 | 第31-33页 |
| 3.3 免疫荧光标记和细胞活性、凋亡实验 | 第33-36页 |
| 3.3.1 实验仪器与设备 | 第33页 |
| 3.3.2 常用试剂及配制 | 第33-34页 |
| 3.3.3 实验步骤 | 第34-36页 |
| 3.4 Real-time PCR 实验 | 第36-40页 |
| 3.4.1 实验仪器与设备 | 第36页 |
| 3.4.2 常用试剂及配制 | 第36页 |
| 3.4.3 Real-time PCR 实验方法 | 第36-40页 |
| 4 结果与讨论 | 第40-64页 |
| 4.1 Parkin 野生型及突变体质粒的鉴定 | 第40-42页 |
| 4.2 Parkin 野生型及其突变体在细胞内的分布和对细胞存活的影响 | 第42-45页 |
| 4.2.1 Parkin 野生型及其突变体在 Hela 细胞内的分布特征 | 第42-44页 |
| 4.2.2 Parkin 及其突变体对细胞存活的影响 | 第44-45页 |
| 4.3 Parkin 野生型及其突变体对线粒体的作用分析 | 第45-51页 |
| 4.3.1 稳定转染 Parkin 野生型及其突变体的 Hela 细胞株的筛选 | 第45-46页 |
| 4.3.2 Parkin 野生型及突变体对线粒体的作用 | 第46-51页 |
| 4.4 Parkin 野生型和突变型对自噬和β-synP123H 蛋白降解的影响 | 第51-61页 |
| 4.4.1 Parkin 与β-syn 的免疫荧光双标记 | 第51-53页 |
| 4.4.2 Parkin 与 LC3 的免疫荧光双标记 | 第53-55页 |
| 4.4.3 β-syn 与 p62 的免疫荧光双标记 | 第55-57页 |
| 4.4.4 Parkin 及其突变体调控β-syn 降解的研究 | 第57-58页 |
| 4.4.5 Parkin 及其突变体对自噬相关蛋白和 mTOR 通路的影响 | 第58-61页 |
| 4.5 在 mRNA 水平上探讨 Parkin 对β-synP123H 的影响 | 第61-64页 |
| 5 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80-81页 |
