| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 缩略词表及注释 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 实验技术路线(1) | 第16-17页 |
| 实验技术路线(2) | 第17-18页 |
| 1 材料与方法 | 第18-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第18-22页 |
| 1.1.1 胃腺癌细胞株 | 第18页 |
| 1.1.2 石蜡组织样本收集 | 第18-19页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第19-20页 |
| 1.1.4 主要实验试剂和耗材 | 第20-21页 |
| 1.1.5 主要抗体 | 第21页 |
| 1.1.6 主要试剂盒 | 第21页 |
| 1.1.7 慢病毒 | 第21-22页 |
| 1.2 实验方法 | 第22-37页 |
| 1.2.1 qPCR | 第22-26页 |
| 1.2.1.1 细胞总RNA的提取和质量鉴定 | 第22-23页 |
| 1.2.1.2 石蜡总RNA的提取和质量鉴定 | 第23-24页 |
| 1.2.1.3 逆转录反应 | 第24-25页 |
| 1.2.1.4 qPCR反应 | 第25-26页 |
| 1.2.2 免疫组化结果评定 | 第26页 |
| 1.2.3 实验常用工作液配制 | 第26-28页 |
| 1.2.4 细胞培养 | 第28-30页 |
| 1.2.4.1 细胞复苏 | 第28-29页 |
| 1.2.4.2 换液和传代 | 第29页 |
| 1.2.4.3 细胞冻存 | 第29-30页 |
| 1.2.5 慢病毒转染细胞株BGC823 | 第30-32页 |
| 1.2.5.1 嘌呤霉素筛选浓度的确定 | 第30-31页 |
| 1.2.5.2 靶细胞感染预实验 | 第31-32页 |
| 1.2.5.3 慢病毒侵染靶细胞正式实验 | 第32页 |
| 1.2.6 Western blotting | 第32-35页 |
| 1.2.6.1 细胞总蛋白提取 | 第32-33页 |
| 1.2.6.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第33页 |
| 1.2.6.3 SDS-PAGE电泳 | 第33-34页 |
| 1.2.6.4 切胶、转膜 | 第34-35页 |
| 1.2.6.5 免疫反应 | 第35页 |
| 1.2.6.6 显影 | 第35页 |
| 1.2.7 统计学处理 | 第35-37页 |
| 2 结果 | 第37-47页 |
| 2.1 miR-1246在胃癌组织中的表达 | 第37-39页 |
| 2.1.1 miR-1246在胃腺癌组、胃腺癌癌旁组以及胃良性病变组中的相对表达量的比较 | 第37-38页 |
| 2.1.2 miR-1246在胃腺癌高、中、低分化组、胃腺癌癌旁组以及胃良性病变组中的相对表达量的比较 | 第38-39页 |
| 2.1.3 miR-1246在胃腺癌中的相对表达水平与临床参数的相关性分析 | 第39页 |
| 2.2 E-cadherin和Vimentin在胃腺癌组织中的表达及相关分析 | 第39-42页 |
| 2.2.1 E-cadherin和Vimentin在胃腺癌中的表达与临床参数的相关性分析 | 第39-41页 |
| 2.2.2 miR-1246在胃腺癌中的相对表达水平与E-cadherin和Vimentin的相关性分析 | 第41-42页 |
| 2.3 最优嘌呤霉素筛选浓度的确定 | 第42-43页 |
| 2.4 慢病毒感染靶细胞MOI的确定和对polybrene的选择 | 第43页 |
| 2.5 慢病毒载体pre-miR-1246 mimics和mimics NC分别稳定转染BGC823细胞 | 第43-47页 |
| 2.5.1 慢病毒稳定转染效率 | 第43-44页 |
| 2.5.2 稳定转染后细胞形态变化 | 第44-45页 |
| 2.5.3 RNA质控结果 | 第45页 |
| 2.5.4 qPCR验证稳定转染后三组细胞miR-1246的相对表达水平 | 第45-46页 |
| 2.5.5 Western blotting验证稳定转染后三组细胞E-cadherin和Vimentin的表达水平 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 综述 | 第55-64页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
