| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-28页 |
| 1.1 甾类化合物概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 甾类化合物 | 第10-11页 |
| 1.1.2 甾类化合物的生理功能与药用价值 | 第11页 |
| 1.1.3 甾类化合物的分类 | 第11-12页 |
| 1.2 甾体化合物的微生物转化 | 第12-18页 |
| 1.2.1 甾体化合物的生产工艺 | 第12-15页 |
| 1.2.2 甾体化合物微生物转化的反应类型 | 第15-17页 |
| 1.2.3 甾体化合物微生物转化技术 | 第17-18页 |
| 1.3 甾体化合物C_(1,2)脱氢反应研究进展 | 第18-24页 |
| 1.3.1 甾体化合物C_(1,2)微生物脱氢简介 | 第18-20页 |
| 1.3.2 具有甾体化合物C_(1,2)位脱氢能力的微生物 | 第20-21页 |
| 1.3.3 甾体化合物C_(1,2)位脱氢反应机理 | 第21-22页 |
| 1.3.4 甾体化合物C_(1,2)位脱氢酶的研究 | 第22-24页 |
| 1.4 本文的选题背景和研究内容 | 第24-28页 |
| 1.4.1 选题背景 | 第24-26页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 第2章 材料和方法 | 第28-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-35页 |
| 2.1.1 菌种 | 第28页 |
| 2.1.2 基因及引物 | 第28-29页 |
| 2.1.3 质粒 | 第29-30页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.6 培养基 | 第32-33页 |
| 2.1.7 配制试剂 | 第33-35页 |
| 2.2 DNA操作方法 | 第35-40页 |
| 2.2.1 质粒的提取 | 第35页 |
| 2.2.2 DNA片段的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.3 酶切反应 | 第36页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 2.2.5 胶回收 | 第37页 |
| 2.2.6 DNA产物纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.7 连接反应 | 第38页 |
| 2.2.8 Gibson组装 | 第38-39页 |
| 2.2.9 菌落PCR | 第39-40页 |
| 2.3 菌株发酵 | 第40-43页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第40-41页 |
| 2.3.2 分枝杆菌感受态细胞的制备与电转化 | 第41页 |
| 2.3.3 诺卡氏菌的传统发酵 | 第41页 |
| 2.3.4 诺卡氏菌的静息细胞发酵 | 第41-42页 |
| 2.3.5 分枝杆菌的全细胞转化底物Ⅰ | 第42页 |
| 2.3.6 分枝杆菌的细胞裂解液转化底物Ⅰ | 第42页 |
| 2.3.7 大肠杆菌的细胞裂解液转化底物Ⅰ | 第42-43页 |
| 2.3.8 产物的提取、检测与定量 | 第43页 |
| 2.4 蛋白质的提取与检测 | 第43-46页 |
| 2.4.1 总蛋白的提取 | 第43-44页 |
| 2.4.2 聚丙烯酰胺凝胶的配置 | 第44页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE检测表达产物 | 第44-46页 |
| 第3章 不同微生物全细胞转化甾体底物Ⅰ | 第46-54页 |
| 3.1 诺卡氏菌传统发酵 | 第46-50页 |
| 3.1.1 诺卡氏菌两步发酵法转化甾体底物Ⅰ的反应机制 | 第46-47页 |
| 3.1.2 环糊精对产物转化率的影响 | 第47-49页 |
| 3.1.3 两相系统对产物转化率的影响 | 第49-50页 |
| 3.2 诺卡氏静息细胞发酵 | 第50-52页 |
| 3.2.1 诺卡氏静息细胞转化甾体底物I的反应机制 | 第50-51页 |
| 3.2.2 发酵培养基组成成分对产物转化率的影响 | 第51-52页 |
| 3.3 分枝杆菌全细胞转化甾体底物Ⅰ | 第52-53页 |
| 3.4 小结 | 第53-54页 |
| 第4章 不同微生物细胞裂解液转化甾体底物Ⅰ | 第54-66页 |
| 4.1 分枝杆菌细胞裂解液转化底物Ⅰ的反应机制 | 第54-57页 |
| 4.1.1 比较全细胞转化法与细胞裂解液转化法 | 第54-55页 |
| 4.1.2 分枝杆菌细胞裂解液转化底物Ⅰ的反应机制 | 第55-57页 |
| 4.2 重组分枝杆菌细胞裂解液转化底物Ⅰ | 第57-62页 |
| 4.2.1 KSTD氨基酸序列分析 | 第57-58页 |
| 4.2.2 重组质粒的构建与验证 | 第58-60页 |
| 4.2.3 分枝杆菌重组菌株的转化 | 第60-61页 |
| 4.2.4 不同pH的缓冲液对产物Ⅳ转化率的影响 | 第61-62页 |
| 4.3 重组大肠杆菌细胞裂解液转化底物Ⅰ | 第62-64页 |
| 4.3.1 重组质粒的构建与验证 | 第62-63页 |
| 4.3.2 kstD、kstD3和kstD_M蛋白的诱导表达 | 第63页 |
| 4.3.3 大肠杆菌重组菌株的转化 | 第63-64页 |
| 4.4 小结 | 第64-66页 |
| 第5章 结论和展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66页 |
| 5.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第76-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
