| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 反硝化作用及其功能微生物 | 第13-14页 |
| 1.1.1 反硝化作用 | 第13页 |
| 1.1.2 反硝化微生物的分类 | 第13-14页 |
| 1.2 反硝化过程相关功能基因及其研究现状 | 第14-19页 |
| 1.2.1 硝酸盐还原酶Nar | 第14-15页 |
| 1.2.2 亚硝酸盐还原酶Nir | 第15-17页 |
| 1.2.3 一氧化氮还原酶Nor | 第17-18页 |
| 1.2.4 一氧化二氮还原酶Nos | 第18-19页 |
| 1.3 施肥对农田氮素流失影响 | 第19-21页 |
| 1.4 微生物群落垂直分布研究 | 第21-22页 |
| 1.5 反硝化微生物多样性的研究方法 | 第22-26页 |
| 1.5.1 T-RFLP技术 | 第22-23页 |
| 1.5.2 PCR-DGGE技术 | 第23页 |
| 1.5.3 实时荧光定量PCR(Real-Time PCR) | 第23-24页 |
| 1.5.4 稳定同位素示踪技术 | 第24页 |
| 1.5.5 红基因组学和宏转录组学 | 第24-26页 |
| 1.6 立题依据和研究目的 | 第26-29页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第26-27页 |
| 1.6.2 研究目的 | 第27-28页 |
| 1.6.3 研究内容 | 第28页 |
| 1.6.4 技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-37页 |
| 2.1 实验样地 | 第29页 |
| 2.2 样品的采集与预处理 | 第29-30页 |
| 2.3 土壤理化性质及反硝化酶活测定 | 第30页 |
| 2.4 土壤微生物总DNA提取 | 第30页 |
| 2.5 DGGE分析 | 第30-32页 |
| 2.6 末端限制性片段长度多态性(PCR-TRFLP)分析 | 第32-33页 |
| 2.7 功能基因克隆和测序 | 第33页 |
| 2.8 实时荧光定量PCR分析 | 第33-35页 |
| 2.9 数据分析 | 第35-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-58页 |
| 3.1 土壤基本理化性质及反硝化酶活 | 第37-39页 |
| 3.2 qPCR结果 | 第39-42页 |
| 3.2.1 16S rRNA的qPCR结果 | 第39-40页 |
| 3.2.2 nirS基因的qPCR结果 | 第40-41页 |
| 3.2.3 nosZ基因的qPCR结果 | 第41-42页 |
| 3.3 nirS基因DGGE结果 | 第42-45页 |
| 3.3.1 nirS基因DGGE图谱分析 | 第42-44页 |
| 3.3.2 nirS基因DGGE群落结构多样性分析 | 第44-45页 |
| 3.4 T-RFLP结果 | 第45-51页 |
| 3.4.1 群落结构多样性分析 | 第45-47页 |
| 3.4.1.1 nirS基因群落结构多样性分析 | 第45-46页 |
| 3.4.1.2 nosZ基因群落结构多样性分析 | 第46-47页 |
| 3.4.2 群落结构堆积图分析 | 第47-51页 |
| 3.4.2.1 nirS基因群落结构堆积图 | 第47-49页 |
| 3.4.2.2 nosZ基因群落结构堆积图 | 第49-51页 |
| 3.5 系统发育树分析 | 第51-55页 |
| 3.5.1 nirS基因系统发育树 | 第51-53页 |
| 3.5.2 nosZ基因系统发育树 | 第53-55页 |
| 3.6 与环境参数的相关分析 | 第55-58页 |
| 3.6.1 nirS基因群落结构与环境参数的RDA分析 | 第55-56页 |
| 3.6.2 nosZ基因群落结构与环境参数的CCA分析 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-64页 |
| 4.1 长期定位施肥对土壤理化性质的影响 | 第58-59页 |
| 4.2 nirS基因反硝化细菌丰度与群落结构分析 | 第59-61页 |
| 4.3 nosZ基因反硝化细菌丰度与群落结构分析 | 第61-64页 |
| 第五章 全文结论与研究建议 | 第64-67页 |
| 5.1 全文结论 | 第64-66页 |
| 5.2 研究建议 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第78页 |
