| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-18页 |
| 1.1 黑色素瘤的现状和治疗 | 第13页 |
| 1.2 肿瘤微环境及金属蛋白酶ADAMTS18对于肿瘤发生发展的作用 | 第13-16页 |
| 1.3 ADAMTS18和黑色素瘤的关系 | 第16页 |
| 1.4 研究目的 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料 | 第18-24页 |
| 2.1 实验动物 | 第18页 |
| 2.2 实验细胞 | 第18页 |
| 2.3 实验试剂 | 第18-21页 |
| 2.4 实验仪器 | 第21-23页 |
| 2.5 实验耗材 | 第23-24页 |
| 第三章 实验方法 | 第24-44页 |
| 3.1 实验小鼠的饲养和繁殖 | 第24-25页 |
| 3.2 小鼠基因型的PCR鉴定 | 第25-28页 |
| 3.2.1 小鼠基因型鉴定原理 | 第25-26页 |
| 3.2.2 小鼠基因型鉴定方法 | 第26-28页 |
| 3.3 RT-PCR检测小鼠不同组织中RNA的表达 | 第28-31页 |
| 3.3.1 TotalRNA的提取 | 第28-29页 |
| 3.3.2 RNA电泳(检测提取的RNA降解程度) | 第29页 |
| 3.3.3 翻转RNA | 第29-30页 |
| 3.3.4 PCR | 第30-31页 |
| 3.4 小鼠组织蛋白质的抽提 | 第31-32页 |
| 3.5 BCA方法蛋白浓度的测定 | 第32-33页 |
| 3.6 蛋白质印迹法(WesternBlot)检测小鼠不同组织中蛋白质的表达 | 第33-35页 |
| 3.7 黑色素瘤细胞的培养 | 第35-37页 |
| 3.7.1 细胞复苏 | 第35-36页 |
| 3.7.2 细胞传代 | 第36-37页 |
| 3.7.3 细胞计数 | 第37页 |
| 3.8 转移黑色素瘤模型的构建 | 第37-38页 |
| 3.9 Transwell黑色素瘤细胞趋化实验 | 第38-40页 |
| 3.9.1 Transwell小室的基本结构 | 第38页 |
| 3.9.2 Transwell的使用方法和基本功能 | 第38-39页 |
| 3.9.3 黑色素瘤细胞的Transwell趋化实验 | 第39-40页 |
| 3.10 Laminin作用下的B16黑色素瘤粘附实验 | 第40-41页 |
| 3.11 苏木精、伊红染色(HE染色) | 第41-42页 |
| 3.12 酶联接免疫吸附剂测定(ELISA) | 第42-44页 |
| 第四章 实验结果 | 第44-58页 |
| 4.1 通过杂交获得C57BL/6纯系Adamts18基因缺陷小鼠 | 第44-46页 |
| 4.2 Adamts18缺失对黑色素瘤转移的作用研究 | 第46-48页 |
| 4.2.1 转移黑色素瘤实验流程 | 第46页 |
| 4.2.2 转移黑色素模型的构建和分析 | 第46-48页 |
| 4.3 ADAMTS18对肺ECM的重塑 | 第48-49页 |
| 4.3.1 B16黑色素瘤细胞中无Adamts18mRNA的表达 | 第48页 |
| 4.3.2 利用酶联免疫吸附测定法探究ADAMTS18对肺ECM的影响 | 第48-49页 |
| 4.4 Laminin(LN)介导的黑色素瘤转移信号通路作用研究 | 第49-53页 |
| 4.4.1 t-PI3K和p-PI3K在KO小鼠和WT小鼠肺组织中表达量的测定 | 第50-51页 |
| 4.4.2 t-SK6和p-SK6在KO小鼠和WT小鼠肺组织中表达量的测定 | 第51-52页 |
| 4.4.3 Laminin(LN)介导PI3K-Akt-mTOR-SK6信号通路促进黑色素瘤的肺转移和生长 | 第52-53页 |
| 4.5 Laminin体外作用B16黑色素瘤细胞的研究 | 第53-58页 |
| 4.5.1 Laminin体外剂量依赖性促进B16黑色素瘤细胞黏附实验 | 第53-55页 |
| 4.5.2 Laminin体外剂量依赖性促进B16黑色素瘤细胞趋化实验 | 第55-58页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第58-61页 |
| 第六章 附录 | 第61-64页 |
| 6.1 常用实验试剂的配制 | 第61-63页 |
| 6.2 科研成果及荣誉 | 第63-64页 |
| 引用文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
