| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 类黄酮(flavonoid) | 第12-13页 |
| 1.1.1 黄酮醇(flavonol) | 第12-13页 |
| 1.1.2 花青苷(anthocyanins) | 第13页 |
| 1.1.3 原花青苷(proanthocyanins) | 第13页 |
| 1.2 水果中的花青素 | 第13-16页 |
| 1.2.1 花青素的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.3 影响花青苷合成的因子 | 第16-22页 |
| 1.3.1 花青素生物合成的转录调控 | 第16-17页 |
| 1.3.2 发育过程对花青素生物合成的调控 | 第17-19页 |
| 1.3.3 环境因子对花青素生物合成的影响 | 第19-20页 |
| 1.3.4 各个调控途径之间的交互关系 | 第20-22页 |
| 1.4 苹果中影响花青苷合成的因子 | 第22页 |
| 1.5 茉莉酸信号中的JAZ蛋白及功能 | 第22-23页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料和方法 | 第24-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 载体 | 第24页 |
| 2.1.3 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5 培养基 | 第25页 |
| 2.1.6 抗生素 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-39页 |
| 2.2.1 植物组织总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 cDNA第一链合成 | 第26页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.4 回收PCR产物 | 第27页 |
| 2.2.5 连接反应 | 第27-28页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态制备和转化 | 第28页 |
| 2.2.7 测序 | 第28页 |
| 2.2.8 质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.9 质粒DNA的酶切 | 第29-30页 |
| 2.2.10 表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.10.1 MdHIR2、MdHIR4、MdJAZ2过量表达载体的构建 | 第30页 |
| 2.2.10.2 pGEX-MdHIR2、MdHIR4原核表达载体的构建 | 第30页 |
| 2.2.10.3 pET32a-MdJAZ2原核表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.10.4 酵母双杂交载体MdHIR1-1、MdHIR1-2、MdHIR2、MdHIR3、MdHIR4、MdJAZ1、MdJAZ2、MdJAZ3、MdJAZ4、MdJAZ5、MdJAZ6、MdJAZ8的构建 | 第31页 |
| 2.2.10.5 MdHIR2、MdHIR4、MdJAZ2瞬时表达载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.11 根癌农杆菌转化方法 | 第31页 |
| 2.2.12 植物材料的准备 | 第31-32页 |
| 2.2.12.1 苹果果实的取样 | 第31-32页 |
| 2.2.13 花青苷测定 | 第32页 |
| 2.2.13.1 花青苷测定原理 | 第32页 |
| 2.2.13.2 花青苷提取步骤 | 第32页 |
| 2.2.14 蛋白技术 | 第32-38页 |
| 2.2.14.1 原核表达MdHIR2、MdHIR4、MdJAZ2蛋白 | 第32-33页 |
| 2.2.14.2 MdHIR2、MdHIR4、MdJAZ2蛋白存在状态检测 | 第33页 |
| 2.2.14.3 MdHIR2、MdHIR4、MdJAZ2蛋白的变性复性 | 第33-34页 |
| 2.2.14.3.1 透析袋的处理 | 第33页 |
| 2.2.14.3.2 试剂配制 | 第33页 |
| 2.2.14.3.3 蛋白变性复性 | 第33-34页 |
| 2.2.14.4 MdHIR2、MdHIR4、MdJAZ2蛋白的纯化 | 第34页 |
| 2.2.14.4.1 MdJAZ2-HIS蛋白纯化 | 第34页 |
| 2.2.14.4.2 MdHIR2、MdHIR4-GST蛋白纯化 | 第34页 |
| 2.2.14.5 Pull-Down | 第34-35页 |
| 2.2.14.6 Western分析蛋白 | 第35页 |
| 2.2.14.6.1 转膜(本实验采用湿转法) | 第35页 |
| 2.2.14.6.2 Western Blot(WB) | 第35页 |
| 2.2.14.7 酵母双杂 | 第35-38页 |
| 2.2.14.7.1 试剂配制 | 第35-37页 |
| 2.2.14.7.2 酵母双杂交步骤 | 第37-38页 |
| 2.2.15 植物总蛋白的提取 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-48页 |
| 3.1 MdJAZ2基因对苹果果实着色的影响 | 第39-40页 |
| 3.1.1 对苹果果实注射MdJAZ2基因及表型分析 | 第39-40页 |
| 3.2 MdHIR基因的发现及对苹果果实着色的影响 | 第40-47页 |
| 3.2.1 酵母双杂筛库得到MdHIR2基因，并对苹果中的MdHIRs基因与拟南芥中的HIRs进行同源性比对 | 第40-41页 |
| 3.2.2 MdJAZs蛋白与MdHIRs蛋白相互作用 | 第41-42页 |
| 3.2.3 MdJAZ蛋白N-末端的ZIM区域与MdHIR蛋白的PHB区域互作 | 第42-44页 |
| 3.2.4 基因MdHIR2和MdHIR4抑制苹果果皮中花青苷的积累 | 第44页 |
| 3.2.5 反义的MdJAZ2和反义的MdHIR4基因可以促进苹果果皮中花青苷的积累 | 第44-47页 |
| 3.3 补充材料 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 4.1 茉莉酸信号中的抑制子JAZ蛋白在调控花青苷合成中的作用 | 第48页 |
| 4.2 植物中HIRs基因的研究 | 第48-49页 |
| 4.3 基因MdHIRs与MdJAZs共同作用抑制苹果果皮花青苷的积累 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 6 参考文献 | 第51-64页 |
| 7 附录 | 第64-66页 |
| 7.1 本文中使用的引物 | 第64-66页 |
| 8 感谢 | 第66-67页 |
| 9 攻读学位期间发表的论文 | 第67页 |
