| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 课题背景 | 第10页 |
| 1.2 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)的简述 | 第10-12页 |
| 1.2.1 Bt蛋白的分类及毒性 | 第11页 |
| 1.2.2 Bt蛋白的杀虫机制 | 第11-12页 |
| 1.2.3 Bt在农业生产中的应用 | 第12页 |
| 1.3 构建无选择标记的删除系统 | 第12-20页 |
| 1.3.1 直接转化法 | 第14页 |
| 1.3.2 共转化法 | 第14-16页 |
| 1.3.2.1 双质粒/双菌株系统 | 第14-15页 |
| 1.3.2.2 双质粒/单菌株系统 | 第15页 |
| 1.3.2.3 单质粒/单菌株系统 | 第15-16页 |
| 1.3.3 转座子介导策略 | 第16页 |
| 1.3.4 染色体内同源重组介导删除法 | 第16-17页 |
| 1.3.5 位点特异性系统介导删除法 | 第17-19页 |
| 1.3.5.1 FLP/FRT系统 | 第17-18页 |
| 1.3.5.2 R/RS系统 | 第18页 |
| 1.3.5.3 Cre/Lox P系统 | 第18-19页 |
| 1.3.6 化学诱导位点特异性重组系统 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 供试水稻品种 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株、质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂和仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第23-25页 |
| 2.2.2 农杆菌侵染转化在水稻 | 第25-26页 |
| 2.2.3 阳性转基因植株检测 | 第26-29页 |
| 2.2.3.1 水稻叶片组织DNA的PCR检测 | 第26-28页 |
| 2.2.3.2 水稻叶片组织RNA的PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.2.3.3 试纸条法定性检测cry1Ab的表达 | 第29页 |
| 2.2.4 阳性转基因植株T_0代收种和T_1代种植 | 第29-32页 |
| 2.2.4.1 T_1代水稻叶片组织DNA的PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 T1代水稻叶片组织RNA的PCR检测 | 第30页 |
| 2.2.4.3 试纸条法定性检测cry1Ab的表达 | 第30页 |
| 2.2.4.4 Elisa定性检测抗虫蛋白表达量 | 第30-31页 |
| 2.2.4.5 Southern Blot检测 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-50页 |
| 3.1 化学诱导重组系统表达载体的构建 | 第32-35页 |
| 3.1.1 转抗鳞翅目基因Cry1Ab化学诱导重组系统载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.2 转抗鳞翅目基因Cry1Ah(m4)化学诱导重组系统载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.3 转抗鳞翅目基因Cry1Ca化学诱导重组系统载体的构建 | 第34页 |
| 3.1.4 转抗同翅目基因Cry30Fa1化学诱导重组系统载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.2 水稻转化以及分子检测 | 第35-50页 |
| 3.2.1 转化获取再生植株 | 第35-36页 |
| 3.2.2 T0代转化植株的分子检测 | 第36-42页 |
| 3.2.2.1 PCR检测 | 第36-40页 |
| 3.2.2.2 RT-PCR验证PCR检测结果 | 第40-41页 |
| 3.2.2.3 Cry1Ab试纸条检测转psc-Ab植株的cryAb的表达 | 第41-42页 |
| 3.2.3 转基因植株T_1代的分子检测及表达分析 | 第42-45页 |
| 3.2.3.1 发生删除的T_1代株系的PCR分析 | 第42-45页 |
| 3.2.3.2 RT-PCR检测抗虫基因转录 | 第45页 |
| 3.2.4 转pUXSHCLF-Ab载体T_1代植株的表达分析 | 第45-46页 |
| 3.2.5 Elisa定性检测T1代转基因植株中蛋白的表达 | 第46-48页 |
| 3.2.6 T1代转基因植株的Southern Blot | 第48-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 转基因T_0、T_1代植株结果分析 | 第50-51页 |
| 4.2 下一步工作计划 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录1 | 第58页 |
| 附录2 | 第58-59页 |
| 附录3 | 第59-63页 |
| 附录4 | 第63-64页 |
| 附录5 | 第64-65页 |
| 附录6 | 第65-69页 |
| 附录7 | 第69-70页 |
| 附录8 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
