| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-24页 |
| 1.1 类黄酮的生物合成及其代谢途径 | 第14-20页 |
| 1.1.1 类黄酮的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 类黄酮的生物合成途径 | 第15-18页 |
| 1.1.2.1 黄酮醇的生物合成和黄酮醇合成酶 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 花青苷的生物合成 | 第17页 |
| 1.1.2.3 原花青苷的生物合成 | 第17-18页 |
| 1.1.3 类黄酮化合物的代谢调控 | 第18-20页 |
| 1.1.3.1 黄酮醇生物合成的调控 | 第18页 |
| 1.1.3.2 花青苷生物合成的调控 | 第18-19页 |
| 1.1.3.3 原花青苷生物合成的调控 | 第19-20页 |
| 1.2 类黄酮的生物学功能 | 第20-24页 |
| 1.2.1 类黄酮在植物体内的功能 | 第20-21页 |
| 1.2.2 类黄酮提高植物非生物胁迫抗性的机制 | 第21-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-41页 |
| 2.1 材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 载体 | 第24页 |
| 2.1.3 抗生素、酶、药品、生化试剂和仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.5 抗生素浓度 | 第26页 |
| 2.1.6 溶液和缓冲液 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-41页 |
| 2.2.1 植物总RNA提取 | 第27页 |
| 2.2.2 植物基因组DNA提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 反转录 | 第28-29页 |
| 2.2.4 基因克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.5 胶回收 | 第30页 |
| 2.2.6 克隆载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.7 大肠杆菌转化 | 第31页 |
| 2.2.8 阳性克隆PCR筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.9 测序 | 第32页 |
| 2.2.10 质粒DNA提取 | 第32页 |
| 2.2.11 单酶切反应 | 第32-33页 |
| 2.2.12 植物过表达载体的构建 | 第33页 |
| 2.2.13 农杆菌转化 | 第33页 |
| 2.2.14 原核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.15 原核表达 | 第35-37页 |
| 2.2.16 王林苹果愈伤转化 | 第37页 |
| 2.2.17 花青苷含量测定 | 第37-38页 |
| 2.2.18 生物信息学分析和预测 | 第38-39页 |
| 2.2.19 实时荧光定量分析(qRT-PCR) | 第39页 |
| 2.2.20 黄酮醇合成酶体外催化活性检测 | 第39页 |
| 2.2.21 活性氧(ROS)水平检测 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-55页 |
| 3.1 苹果黄酮醇合成酶基因MdFLS1的克隆与生物信息学分析 | 第41-46页 |
| 3.1.1 苹果黄酮醇合成酶基因MdFLS1的克隆 | 第41页 |
| 3.1.2 基因结构及蛋白质功能域分析 | 第41-42页 |
| 3.1.3 苹果MdFLS1蛋白的亲/疏水性及二级、三级结构预测 | 第42-43页 |
| 3.1.4 苹果MdFLS1蛋白的信号肽、转运肽和跨膜结构分析以及亚细胞定位预测 | 第43-44页 |
| 3.1.5 苹果MdFLS1进化树分析 | 第44-45页 |
| 3.1.6 .启动子顺式作用元件分析 | 第45-46页 |
| 3.2 苹果MdFLS1基因的组织表达分析及其对环境胁迫的响应 | 第46-48页 |
| 3.2.1 苹果MdFLS1基因的组织表达分析 | 第46-47页 |
| 3.2.2 苹果MdFLS1基因对不同环境胁迫的响应 | 第47-48页 |
| 3.3 苹果MdFLS1蛋白的原核表达和体外催化活性分析 | 第48-50页 |
| 3.4 苹果MdFLS1抑制苹果愈伤花青苷积累 | 第50-51页 |
| 3.5 黄酮醇的积累提高苹果愈伤组织的抗盐性 | 第51-53页 |
| 3.6 黄酮醇的积累提高苹果愈伤组织的抗盐性的原因 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| 4.1 苹果黄酮醇合成酶基因MdFLS1的生物信息学分析 | 第55页 |
| 4.2 黄酮醇合成酶基因过量表达抑制植物着色 | 第55-57页 |
| 4.3 MdFLS1过量表达提高苹果愈伤组织的耐盐性 | 第57-58页 |
| 4.4 黄酮醇合成酶对植物生长发育的调节 | 第58-60页 |
| 4.4.1 黄酮醇影响气孔发育和运动 | 第58-59页 |
| 4.4.2 黄酮醇影响生长素运输 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 6 参考文献 | 第61-75页 |
| 7 附录 | 第75-78页 |
| 7.1 SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围 | 第75页 |
| 7.2 配制5%SDS-PAGE浓缩胶 | 第75页 |
| 7.3 本文所使用的引物 | 第75-76页 |
| 7.3.1 基因克隆引物 | 第75页 |
| 7.3.2 定量引物 | 第75-76页 |
| 7.4 载体结构示意图 | 第76-78页 |
| 7.4.1 pMD?18-TVector的结构 | 第76页 |
| 7.4.2 植物过量表达和抑制载体结构 | 第76页 |
| 7.4.3 pEASY?-BluntE1表达载体示意图 | 第76-78页 |
| 8 致谢 | 第78-79页 |
| 9 攻读学位期间发表和参与发表的论文 | 第79页 |
