| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩写表 | 第11-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-25页 |
| 1.1 光酶诱导技术提高植物次生代谢产物含量的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 Chalcomoracin研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 Chalcomoracin的药理作用 | 第17-18页 |
| 1.2.2 Chalcomoracin的生物合成 | 第18-19页 |
| 1.3 Diels-Alderase的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 Diels-Alder反应和Diels-Alder型加合物 | 第19-20页 |
| 1.3.2 Diels-Alderase研究现状 | 第20-23页 |
| 1.4 本论文的研究内容与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 光酶诱导桑叶中Diels-Alderase的分离纯化 | 第25-60页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 | 第26-28页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-40页 |
| 2.3.1 Diels-Alderase分离纯化所使用的桑叶材料的处理 | 第29页 |
| 2.3.2 蛋白浓度测定 | 第29-30页 |
| 2.3.3 酶促反应及酶活检测 | 第30页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE电泳分析蛋白纯化效果 | 第30-33页 |
| 2.3.5 不同处理组桑叶叶绿体中chalcomoracin含量测定 | 第33-35页 |
| 2.3.6 蛋白纯化条件 | 第35-40页 |
| 2.3.6.1 不同处理组桑叶中Chalcomoracin含量检测及其Diels-Alderase酶活检测 | 第35页 |
| 2.3.6.2 硫酸铵分级沉淀 | 第35页 |
| 2.3.6.3 疏水层析条件 | 第35-37页 |
| 2.3.6.4 阴离子交换层析条件 | 第37-38页 |
| 2.3.6.5 阳离子交换层析条件 | 第38-39页 |
| 2.3.6.6 凝胶过滤层析条件 | 第39-40页 |
| 2.3.7 Gel Filtration Calibration Kits预测目标蛋白分子量范围 | 第40页 |
| 2.4 实验结果 | 第40-57页 |
| 2.4.1 不同处理桑叶叶绿体中chalcomoracin含量 | 第40-41页 |
| 2.4.2 光酶诱导桑叶中Diels-Alderase的分离纯化 | 第41-51页 |
| 2.4.2.1 不同处理组桑叶中Chalcomoracin的含量及Diels-Alderase酶活性分析 | 第41-44页 |
| 2.4.2.2 硫酸铵分级沉淀 | 第44页 |
| 2.4.2.3 疏水层析 | 第44-46页 |
| 2.4.2.4 阴离子交换层析 | 第46-48页 |
| 2.4.2.5 阳离子交换层析 | 第48页 |
| 2.4.2.6 凝胶过滤层析 | 第48-51页 |
| 2.4.3 蛋白纯化策略 | 第51-55页 |
| 2.4.4 Gel Filtration Calibration Kits预测目标蛋白分子量范围 | 第55-57页 |
| 2.5 讨论 | 第57-58页 |
| 2.5.1 实验材料的选择 | 第57页 |
| 2.5.2 叶绿体中Chalcomoracin含量 | 第57-58页 |
| 2.5.3 蛋白纯化策略 | 第58页 |
| 2.5.4 目标蛋白分子量预测 | 第58页 |
| 2.6 本章小结 | 第58-60页 |
| 第三章 具有Diels-Alderase催化活性的目标蛋白质谱鉴定及氨基酸序列分析 | 第60-74页 |
| 3.1 引言 | 第60-61页 |
| 3.2 实验材料 | 第61-62页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第61页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第61-62页 |
| 3.3 实验方法 | 第62-65页 |
| 3.3.1 LC-MS/MS蛋白鉴定 | 第62-63页 |
| 3.3.1.1 LC-MS/MS蛋白鉴定与分析 | 第62-63页 |
| 3.3.1.2 LC-MS/MS质谱操作及数据库检索 | 第63页 |
| 3.3.2 MALDI-TOF/TOF蛋白鉴定 | 第63-65页 |
| 3.3.2.1 MALDI-TOF/TOF蛋白鉴定与分析 | 第63-64页 |
| 3.3.2.2 MALDI-TOF/TOF质谱操作及数据库检索 | 第64-65页 |
| 3.4 实验结果 | 第65-73页 |
| 3.4.1 LC-MS/MS鉴定结果 | 第65-70页 |
| 3.4.2 MALDI-TOF/TOF鉴定结果 | 第70-73页 |
| 3.5 讨论 | 第73页 |
| 3.6 本章小结 | 第73-74页 |
| 第四章 SBPase的克隆与原核表达 | 第74-90页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 实验材料 | 第74-76页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第74-75页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第75-76页 |
| 4.3 实验方法 | 第76-84页 |
| 4.3.1 溶液和培养基 | 第76页 |
| 4.3.2 目的序列的获取 | 第76-80页 |
| 4.3.2.1 桑叶总RNA的提取 | 第76-78页 |
| 4.3.2.2 目的序列的获取 | 第78-80页 |
| 4.3.3 SBPase基因原核表达载体的构建 | 第80-82页 |
| 4.3.4 SBPase在大肠杆菌中的表达 | 第82页 |
| 4.3.5 表达产物SDS-PAGE分析 | 第82-83页 |
| 4.3.6 SBPase的Diels-Alderase活性验证 | 第83-84页 |
| 4.4 实验结果 | 第84-88页 |
| 4.4.1 以pET-19b为载体对SBPase基因进行原核表达 | 第84-87页 |
| 4.4.1.1 pET-19b-SBPase表达载体构建及验证 | 第84-86页 |
| 4.4.1.2 E.coli-pET 19b-SBPase诱导表达 | 第86-87页 |
| 4.4.2 SBPase催化Diels-Alder反应的活性 | 第87-88页 |
| 4.5 讨论 | 第88-89页 |
| 4.5.1 重组蛋白活性鉴定 | 第88-89页 |
| 4.6 本章小结 | 第89-90页 |
| 第五章 全文总结 | 第90-92页 |
| 5.1 总结 | 第90页 |
| 5.2 展望 | 第90-92页 |
| 附表 | 第92-115页 |
| 参考文献 | 第115-122页 |
| 作者简介 | 第122页 |
