| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 上篇 文献综述 | 第14-32页 |
| 第一章 淡水养殖鱼类嗜水气单胞菌疫苗研究进展 | 第14-24页 |
| 1 传统疫苗 | 第14-16页 |
| 1.1 全菌灭活疫苗 | 第14-15页 |
| 1.2 单位疫苗 | 第15-16页 |
| 2 生物被膜疫苗 | 第16页 |
| 3 基因工程疫苗 | 第16-17页 |
| 3.1 基因工程亚单位苗 | 第16页 |
| 3.2 基因缺失苗 | 第16-17页 |
| 3.3 DNA疫苗 | 第17页 |
| 4 佐剂疫苗 | 第17-18页 |
| 4.1 脂质体佐剂疫苗 | 第17-18页 |
| 4.2 免疫刺激复合体佐剂疫苗 | 第18页 |
| 4.3 基于多聚物佐剂的疫苗 | 第18页 |
| 4.4 乳化佐剂疫苗 | 第18页 |
| 5 展望 | 第18-20页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 第二章 淡水养殖鱼类口服免疫的研究进展 | 第24-32页 |
| 1 口服免疫的应用 | 第24-25页 |
| 2 影响鱼类口服免疫效果的因素 | 第25页 |
| 3 口服疫苗佐剂 | 第25-27页 |
| 3.1 海藻酸钠 | 第26页 |
| 3.2 聚交酯醣酯聚合物 | 第26-27页 |
| 3.3 壳聚糖及其衍生物 | 第27页 |
| 3.4 其他辅料 | 第27页 |
| 4 展望 | 第27-29页 |
| 参考文献 | 第29-32页 |
| 下篇 试验研究 | 第32-94页 |
| 第三章 嗜水气单胞菌外膜蛋白在大肠杆菌中高效表达的条件优化 | 第32-44页 |
| 1 材料与方法 | 第33-36页 |
| 1.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 1.1.1 菌株 | 第33页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 1.2.1 不同培养基对蛋白表达量的影响 | 第34页 |
| 1.2.2 IPTG诱导条件对对蛋白表达量的影响 | 第34-35页 |
| 1.2.3 SDS-PAGE蛋白浓度分析 | 第35-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-39页 |
| 2.1 不同培养基对外膜蛋白表达量的影响 | 第36-37页 |
| 2.2 IPTG对外膜蛋白表达量的影响 | 第37-39页 |
| 2.2.1 IPTG诱导时间对蛋白表达量的影响 | 第37页 |
| 2.2.2 IPTG工作浓度对蛋白表达量的影响 | 第37-38页 |
| 2.2.3 诱导温度对蛋白表达量的影响 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 第四章 嗜水气单胞菌外膜蛋白亚单位口服疫苗制备工艺优化与性能评价 | 第44-58页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 1.1 试验材料 | 第45页 |
| 1.2 微球口服疫苗制备方法 | 第45-46页 |
| 1.3 微球口服疫苗制备优化与微球性质分析 | 第46-48页 |
| 1.3.1 微球口服疫苗制备优化 | 第46页 |
| 1.3.2 膨胀率 | 第46-47页 |
| 1.3.3 包封率 | 第47页 |
| 1.3.4 载蛋白量 | 第47页 |
| 1.3.5 抗原完整性与免疫反应性 | 第47-48页 |
| 1.3.6 酸碱条件下释放试验 | 第48页 |
| 1.3.7 安全性试验 | 第48页 |
| 1.3.8 贮存试验 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-53页 |
| 2.1 微球形态 | 第48-49页 |
| 2.2 粒径分析 | 第49-51页 |
| 2.3 抗原完整性与免疫反应性 | 第51-52页 |
| 2.4 包封率 | 第52页 |
| 2.5 载蛋白量 | 第52页 |
| 2.6 酸碱条件蛋白释放试验 | 第52页 |
| 2.7 膨胀率 | 第52-53页 |
| 2.8 安全性试验 | 第53页 |
| 2.9 贮存稳定性试验 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 第五章 嗜水气单胞菌外膜蛋白微球疫苗的小鼠口服免疫试验 | 第58-78页 |
| 1 材料与方法 | 第59-64页 |
| 1.1 试验材料 | 第59页 |
| 1.2 实验动物 | 第59页 |
| 1.3 免疫程序 | 第59-60页 |
| 1.4 免疫方法 | 第60页 |
| 1.4.1 皮下注射免疫 | 第60页 |
| 1.4.2 灌胃免疫 | 第60页 |
| 1.5 样品采集 | 第60-61页 |
| 1.5.1 回肠肠段取样与收集肠腔内容物洗液 | 第60-61页 |
| 1.5.2 清 | 第61页 |
| 1.5.3 脾脏淋巴细胞 | 第61页 |
| 1.6 样品检测 | 第61-64页 |
| 1.6.1 酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清特异性IgG和IgA、肠sIgA水平 | 第61-62页 |
| 1.6.2 脾脏淋巴细胞细胞因子mRNA表达水平 | 第62-63页 |
| 1.6.3 回肠肠段石蜡切片制备 | 第63-64页 |
| 1.6.4 免疫保护试验 | 第64页 |
| 1.6.5 数据统计分析 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-72页 |
| 2.1 肠内容物IgA水平的ELISA检测 | 第64-66页 |
| 2.2 血清IgA水平的ELISA检测 | 第66-68页 |
| 2.3 血清IgG水平的ELISA检测 | 第68页 |
| 2.4 脾脏淋巴细胞细胞因子mRNA表达水平检测 | 第68-70页 |
| 2.5 回肠淋巴相关组织的观察 | 第70-71页 |
| 2.6 免疫保护试验 | 第71-72页 |
| 2.6.1 LD50测定 | 第71-72页 |
| 2.6.2 攻毒免疫保护试验 | 第72页 |
| 3 讨论 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 第六章 嗜水气单胞菌外膜蛋白微球疫苗的鳊鱼口服免疫试验 | 第78-94页 |
| 1 材料与方法 | 第79-83页 |
| 1.1 试验材料 | 第79页 |
| 1.2 试验动物 | 第79页 |
| 1.3 口服免疫用饲料制备 | 第79页 |
| 1.4 免疫程序 | 第79-80页 |
| 1.5 样品采集 | 第80-81页 |
| 1.5.1 清 | 第80页 |
| 1.5.2 头肾细胞分离 | 第80-81页 |
| 1.5.3 体表黏液 | 第81页 |
| 1.5.4 后肠黏液 | 第81页 |
| 1.6 实验室检测项目 | 第81-83页 |
| 1.6.1 细胞吞噬活性检测 | 第81页 |
| 1.6.2 血清、后肠黏液、体表黏液IgM抗体检测 | 第81-82页 |
| 1.6.3 血清超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 | 第82页 |
| 1.6.4 清溶菌酶活性的测定 | 第82页 |
| 1.6.5 数据的统计分析 | 第82页 |
| 1.6.7 半数致死量(LD50)测定 | 第82-83页 |
| 1.6.8 免疫保护率的测定 | 第83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-88页 |
| 2.1 头肾细胞吞噬活性的检测 | 第83-84页 |
| 2.1.1 流式细胞仪分析 | 第83-84页 |
| 2.1.2 平板计数结果 | 第84页 |
| 2.2 IgM的ELISA检测 | 第84-86页 |
| 2.2.1 血清 | 第84-85页 |
| 2.2.2 体表黏液 | 第85-86页 |
| 2.2.3 后肠黏液 | 第86页 |
| 2.3 血清超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 | 第86-87页 |
| 2.4 血清溶菌酶(LSZ)活性的测定 | 第87页 |
| 2.5 免疫保护率的测定 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-91页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 附录 | 第94-96页 |
| 全文总结 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
