| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 引言和文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 引言及本文研究内容和意义 | 第12-13页 |
| 1.2 心脏的发生与发育 | 第13-15页 |
| 1.3 心脏诱导的研究 | 第15页 |
| 1.4 心肌肥大的概述 | 第15-17页 |
| 1.5 心肌肥大过程中的信号转导 | 第17页 |
| 1.6 刺激心肌肥大的主要因素 | 第17-21页 |
| 1.6.1 机械应力 | 第17-18页 |
| 1.6.2 神经激素因子介导机械应力诱导性心肌肥大 | 第18-20页 |
| 1.6.3 机械应力转化为生化信号诱导心肌肥大 | 第20页 |
| 1.6.4 其他因素引起心肌肥大 | 第20-21页 |
| 1.7 心肌肥大信号途径中的关键转录因子 | 第21页 |
| 1.8 RHA干扰(RNAI)技术 | 第21-22页 |
| 1.9 利用模式动物进行遗传学分析 | 第22-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-47页 |
| 2.1 材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要实验仪器和耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.3 质粒、细胞与菌株 | 第27-28页 |
| 2.1.4 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第28-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-47页 |
| 2.2.1 异丙肾上腺素(ISO)刺激心肌肥大小鼠模型的制备 | 第29页 |
| 2.2.2 原代新生大鼠心肌细胞的分离和培养 | 第29-32页 |
| 2.2.3 细胞与心脏组织总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.4 RT-PCR | 第33-34页 |
| 2.2.5 PCR的扩增 | 第34页 |
| 2.2.6 PCR产物纯化与回收 | 第34-35页 |
| 2.2.7 DNA片段的连接 | 第35页 |
| 2.2.8 感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.9 转化 | 第36页 |
| 2.2.10 少量质粒的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.11 阳性克隆的筛选和鉴定 | 第37页 |
| 2.2.12 测序 | 第37页 |
| 2.2.13 真核表达质粒的大量提取 | 第37-38页 |
| 2.2.14 重组质粒的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.15 常规的细胞培养及转染 | 第39-40页 |
| 2.2.16 转基因稳定表达细胞系的建立 | 第40页 |
| 2.2.17 动物和人类组织蛋白的提取与检测 | 第40-41页 |
| 2.2.18 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第41-42页 |
| 2.2.19 Western blot免疫印记 | 第42-43页 |
| 2.2.20 siRNA技术 | 第43-44页 |
| 2.2.21 免疫组化技术(以石蜡切片为例) | 第44-45页 |
| 2.2.22 免疫荧光技术 | 第45-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-68页 |
| 3.1 SMYD1基因的生物信息学分析 | 第47页 |
| 3.2 SMYD1基因在L-甲状腺素刺激的病理性肥大小鼠模型中的形态学表达研究 | 第47-50页 |
| 3.2.1 Smyd1基因在L-甲状腺素刺激的病理性肥大小鼠模型中的蛋白水平上的表达研究 | 第48-49页 |
| 3.2.2 Smyd1基因在L-甲状腺素刺激的病理性肥大小鼠模型中的RNA水平上的表达研究 | 第49-50页 |
| 3.3 SMYD1基因在异丙肾上腺素(ISO)刺激的病理性肥大小鼠模型中的形态学表达研究 | 第50-54页 |
| 3.3.1 Smyd1基因在异丙肾上腺素(ISO)刺激的病理性肥大小鼠模型中的蛋白水平上的表达研究 | 第53-54页 |
| 3.3.2 Smyd1基因在异丙肾上腺素(ISO)刺激的病理性肥大小鼠模型中的RNA水平上的表达研究 | 第54页 |
| 3.4 SMYD1基因在生理性心肌肥大小鼠模型中的表达研究 | 第54-56页 |
| 3.5 SMYD1基因在原代新生大鼠心肌细胞中的表达研究 | 第56-59页 |
| 3.6 SMYD1过表达系分析SMYD1在心肌肥大中的作用 | 第59-61页 |
| 3.6.1 免疫荧光分析Smyd1在过表达细胞系中的表达 | 第59-60页 |
| 3.6.2 心肌肥大标记基因在Smyd1过表达细胞系中的表达上调 | 第60-61页 |
| 3.7 利用SMYD1干扰细胞系分析SMYD1在心肌肥大中的作用 | 第61-65页 |
| 3.7.1 RNiA的设计与合成以及重组干扰质粒的构建 | 第61-63页 |
| 3.7.2 Smydl干扰细胞转染和筛选与鉴定 | 第63-64页 |
| 3.7.3 Smyd1基因在Smyd1干扰细胞系中的表达显著下降 | 第64-65页 |
| 3.8 SMYD1基因在肥大人类心脏中的表达初步研究 | 第65-68页 |
| 第四章 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 结语 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 附录1 | 第78-79页 |
| 附录2 | 第79-81页 |
| 感谢 | 第81-82页 |
