| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 引言 | 第11页 |
| 1.1 牛分枝杆菌感染谱概述 | 第11-12页 |
| 1.2 牛结核流行情况概述 | 第12-13页 |
| 1.3 牛结核检测与控制 | 第13-15页 |
| 1.3.1 细菌学检测 | 第13-14页 |
| 1.3.2 免疫学检测 | 第14页 |
| 1.3.3 分子生物学检测 | 第14-15页 |
| 1.3.4 牛结核控制策略 | 第15页 |
| 1.4 疫苗 | 第15-19页 |
| 1.4.1 卡介苗(BCG) | 第16页 |
| 1.4.2 亚单位疫苗 | 第16-17页 |
| 1.4.3 病毒载体疫苗 | 第17页 |
| 1.4.4 减毒苗 | 第17-18页 |
| 1.4.5 小结 | 第18-19页 |
| 1.5 基因与结核疫苗开发 | 第19-21页 |
| 1.5.1 基因 | 第19-20页 |
| 1.5.2 基因筛选 | 第20-21页 |
| 第二章 目的意义 | 第21-22页 |
| 第三章 材料和方法 | 第22-34页 |
| 3.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 3.1.1 菌种 | 第22页 |
| 3.1.2 载体以及质粒 | 第22-24页 |
| 3.1.3 培养基 | 第24页 |
| 3.1.4 工具酶、主要试剂以及仪器 | 第24页 |
| 3.1.5 引物 | 第24-25页 |
| 3.1.6 抗生素和缓冲液 | 第25-26页 |
| 3.2 牛分枝杆菌基因表达谱分析 | 第26-30页 |
| 3.2.1 培养基配制 | 第26-27页 |
| 3.2.2 缺铁培养条件对BCG菌株生长影响的初步研究 | 第27页 |
| 3.2.3 分枝杆菌离子缺陷条件培养 | 第27-28页 |
| 3.2.4 分枝杆菌RNA提取 | 第28页 |
| 3.2.5 总RNA的纯化 | 第28页 |
| 3.2.6 RNA甲醛变性电泳 | 第28-29页 |
| 3.2.7 芯片的双色标记和扫描 | 第29页 |
| 3.2.8 表达谱芯片的验证 | 第29-30页 |
| 3.3 牛分枝杆菌基因缺失载体的构建 | 第30-34页 |
| 3.3.1 载体构建 | 第30-33页 |
| 3.3.2 重组载体的所携带筛选基因的功能验证 | 第33页 |
| 3.3.3 牛分枝杆菌电转化以及筛选 | 第33-34页 |
| 第四章 结果 | 第34-50页 |
| 4.1 基因表达谱分析 | 第34-47页 |
| 4.1.1 最佳添加量的确定 | 第34页 |
| 4.1.2 缺铁培养条件对BCG菌株生长的评估 | 第34-35页 |
| 4.1.3 牛分枝杆菌总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 4.1.4 差异基因筛选 | 第36-43页 |
| 4.1.5 表达谱芯片验证 | 第43页 |
| 4.1.6 基因的分布图以及分层聚类分析 | 第43-47页 |
| 4.2 牛分枝杆菌基因缺失载体的构建 | 第47-50页 |
| 4.2.1 自杀载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.2 Sac B基因的功能验证 | 第48-49页 |
| 4.2.3 电转化和筛选 | 第49-50页 |
| 第五章 讨论 | 第50-56页 |
| 5.1 铁离子影响细菌生长 | 第50页 |
| 5.2 分枝杆菌铁代谢相关基因 | 第50-53页 |
| 5.2.1 铁的感知 | 第51-52页 |
| 5.2.2 铁的捕获 | 第52页 |
| 5.2.3 铁的转运 | 第52-53页 |
| 5.2.4 铁的储存 | 第53页 |
| 5.2.5 铁的全局调控 | 第53页 |
| 5.3 铁的应答 | 第53-54页 |
| 5.4 基因缺失疫苗的安全性问题 | 第54页 |
| 5.5 基因重组问题分析 | 第54-56页 |
| 第六章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |