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原发性胆汁性肝硬化相关单抗1F9的抗原分离与鉴定

缩略语表第6-9页
中文摘要第9-14页
Abstract第14-17页
前言第18-19页
文献回顾第19-34页
第一部分 1F9 抗原与 PBC 的相关性研究第34-42页
    1 实验材料第34-35页
        1.1 细胞株第34页
        1.2 临床标本第34页
        1.3 主要试剂第34-35页
        1.4 主要仪器第35页
    2 方法第35-36页
        2.1 杂交瘤细胞培养第35页
        2.2 1F9 单克隆抗体的制备和纯化第35页
        2.3 免疫组织化学第35-36页
    3 结果第36-40页
    4 讨论第40-42页
第二部分 1F9 候选抗原的鉴定第42-56页
    1 实验材料第42-43页
        1.1 细胞株第42页
        1.2 主要试剂第42页
        1.3 主要仪器第42-43页
    2 方法第43-49页
        2.1 细胞培养第43页
        2.2 检测分析 1F9 单抗亚型,轻、重链可变区序列及二级空间结构第43页
        2.3 免疫细胞化学第43-44页
        2.4 免疫沉淀富集 1F9 抗原第44-45页
        2.5 免疫沉淀产物的 Western blot 验证第45页
        2.6 免疫沉淀产物的银染分析第45-46页
        2.7 切胶、酶解和质谱分析第46-49页
    3 结果第49-54页
        3.1 1F9 单抗信息第49页
        3.2 1F9 抗原阳性表达细胞系:HepG2 细胞系和 HK2 细胞系第49-50页
        3.3 免疫沉淀富集 1F9 抗原,银染和 Western blot 验证第50-52页
        3.4 切胶、酶解和质谱分析第52-54页
    4 讨论第54-56页
第三部分 1F9 候选抗原的验证第56-68页
    1 材料第56-57页
        1.1 细胞株及正常组织芯片第56页
        1.2 主要试剂第56-57页
        1.3 主要仪器第57页
    2 方法第57-61页
        2.1 细胞培养第57页
        2.2 免疫沉淀第57页
        2.3 Western blot第57页
        2.4 免疫组织化学第57页
        2.5 免疫荧光/激光共聚焦第57-58页
        2.6 免疫细胞化学第58页
        2.7 LAMP1、LAMP2 原核表达第58-59页
        2.8 LAMP1、LAMP2 真核表达(瞬时转染)第59-60页
        2.9 免疫电镜第60-61页
    3 结果第61-66页
        3.1 利用免疫沉淀结合 Western blot,验证 1F9 单抗和 LAMP2 单抗相互识别对方抗原第61页
        3.2 利用免疫组织化学方法,对比检测 1F9 抗原与 LAMP2 在连续正常组织芯片及连续 PBC 组织切片中的表达与分布第61-63页
        3.3 利用免疫荧光/激光共聚焦,分析 1F9 抗原与 LAMP2 在细胞中的共定位情况第63-64页
        3.4 利用真核表达系统,验证 1F9 单抗对外源 LAMP2 蛋白的识别第64-65页
        3.5 利用免疫电镜技术,分析 1F9 抗原与 LAMP2 在正常肝脏组织和 PBC 肝脏组织中的亚细胞定位第65-66页
    4 讨论第66-68页
小结第68-69页
参考文献第69-83页
个人简历和研究成果第83-84页
致谢第84-85页

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