缩略语表 | 第6-9页 |
中文摘要 | 第9-14页 |
Abstract | 第14-17页 |
前言 | 第18-19页 |
文献回顾 | 第19-34页 |
第一部分 1F9 抗原与 PBC 的相关性研究 | 第34-42页 |
1 实验材料 | 第34-35页 |
1.1 细胞株 | 第34页 |
1.2 临床标本 | 第34页 |
1.3 主要试剂 | 第34-35页 |
1.4 主要仪器 | 第35页 |
2 方法 | 第35-36页 |
2.1 杂交瘤细胞培养 | 第35页 |
2.2 1F9 单克隆抗体的制备和纯化 | 第35页 |
2.3 免疫组织化学 | 第35-36页 |
3 结果 | 第36-40页 |
4 讨论 | 第40-42页 |
第二部分 1F9 候选抗原的鉴定 | 第42-56页 |
1 实验材料 | 第42-43页 |
1.1 细胞株 | 第42页 |
1.2 主要试剂 | 第42页 |
1.3 主要仪器 | 第42-43页 |
2 方法 | 第43-49页 |
2.1 细胞培养 | 第43页 |
2.2 检测分析 1F9 单抗亚型,轻、重链可变区序列及二级空间结构 | 第43页 |
2.3 免疫细胞化学 | 第43-44页 |
2.4 免疫沉淀富集 1F9 抗原 | 第44-45页 |
2.5 免疫沉淀产物的 Western blot 验证 | 第45页 |
2.6 免疫沉淀产物的银染分析 | 第45-46页 |
2.7 切胶、酶解和质谱分析 | 第46-49页 |
3 结果 | 第49-54页 |
3.1 1F9 单抗信息 | 第49页 |
3.2 1F9 抗原阳性表达细胞系:HepG2 细胞系和 HK2 细胞系 | 第49-50页 |
3.3 免疫沉淀富集 1F9 抗原,银染和 Western blot 验证 | 第50-52页 |
3.4 切胶、酶解和质谱分析 | 第52-54页 |
4 讨论 | 第54-56页 |
第三部分 1F9 候选抗原的验证 | 第56-68页 |
1 材料 | 第56-57页 |
1.1 细胞株及正常组织芯片 | 第56页 |
1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
1.3 主要仪器 | 第57页 |
2 方法 | 第57-61页 |
2.1 细胞培养 | 第57页 |
2.2 免疫沉淀 | 第57页 |
2.3 Western blot | 第57页 |
2.4 免疫组织化学 | 第57页 |
2.5 免疫荧光/激光共聚焦 | 第57-58页 |
2.6 免疫细胞化学 | 第58页 |
2.7 LAMP1、LAMP2 原核表达 | 第58-59页 |
2.8 LAMP1、LAMP2 真核表达(瞬时转染) | 第59-60页 |
2.9 免疫电镜 | 第60-61页 |
3 结果 | 第61-66页 |
3.1 利用免疫沉淀结合 Western blot,验证 1F9 单抗和 LAMP2 单抗相互识别对方抗原 | 第61页 |
3.2 利用免疫组织化学方法,对比检测 1F9 抗原与 LAMP2 在连续正常组织芯片及连续 PBC 组织切片中的表达与分布 | 第61-63页 |
3.3 利用免疫荧光/激光共聚焦,分析 1F9 抗原与 LAMP2 在细胞中的共定位情况 | 第63-64页 |
3.4 利用真核表达系统,验证 1F9 单抗对外源 LAMP2 蛋白的识别 | 第64-65页 |
3.5 利用免疫电镜技术,分析 1F9 抗原与 LAMP2 在正常肝脏组织和 PBC 肝脏组织中的亚细胞定位 | 第65-66页 |
4 讨论 | 第66-68页 |
小结 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-83页 |
个人简历和研究成果 | 第83-84页 |
致谢 | 第84-85页 |