| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1. 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 水稻齿叶矮缩病毒的研究概况 | 第13-16页 |
| 1.1.1 水稻锯齿叶矮缩病的发现及危害 | 第13页 |
| 1.1.2 水稻齿叶矮缩病的病害症状 | 第13页 |
| 1.1.3 RRSV的病原性质及传播介体 | 第13页 |
| 1.1.4 水稻齿叶矮缩病的防治策略 | 第13-14页 |
| 1.1.5 RRSV基因组结构及其蛋白功能 | 第14-16页 |
| 1.2 植物病毒病症状形成机制的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 miRNA的研究概况 | 第17-25页 |
| 1.3.1 miRNA的发现及产生 | 第17-18页 |
| 1.3.2 miRNA的预测方法 | 第18-20页 |
| 1.3.3 miRNA在生物体内的功能 | 第20-22页 |
| 1.3.4 miRNA作用的机制 | 第22-23页 |
| 1.3.5 miRNA319和miRNA164 | 第23-25页 |
| 1.4 转基因技术及其应用 | 第25-28页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2. 水稻齿叶矮缩病株miRNA319和miRNA164表达量的检测 | 第29-34页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-32页 |
| 2.1.1 材料 | 第29页 |
| 2.1.1.1 供试材料 | 第29页 |
| 2.1.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.2 方法 | 第29-32页 |
| 2.1.2.1 日本晴健康水稻和日本晴齿叶矮缩病株总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.1.2.2 日本晴水稻齿叶矮缩病株总miRNA的提取 | 第30页 |
| 2.1.2.3 总miRNA的聚丙烯酰胺电泳 | 第30-31页 |
| 2.1.2.4 miRNA319和miRNA164转膜 | 第31页 |
| 2.1.2.5 日本晴水稻miRNA319和miRNA164的Northern Blot | 第31-32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-33页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第33-34页 |
| 3. 利用荧光定量PCR检测miRNA319和miRNA164靶基因的表达量 | 第34-41页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-36页 |
| 3.1.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1.1 供试材料 | 第34页 |
| 3.1.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.2 方法 | 第34-36页 |
| 3.1.2.1 本研究中所用到的引物 | 第34页 |
| 3.1.2.2 RNA的提取和质量检测 | 第34页 |
| 3.1.2.3 cDNA的合成 | 第34-35页 |
| 3.1.2.4 目的基因表达量的荧光定量检测 | 第35-36页 |
| 3.1.2.5 Real Time PCR检测健康和RRSV侵染水稻中目的基因的表达量 | 第36页 |
| 3.2 结果分析 | 第36-39页 |
| 3.2.1 样品中总RNA质量检测 | 第36页 |
| 3.2.2 目的基因和内参的溶解曲线 | 第36-37页 |
| 3.2.3 目的基因和内参基因的扩增曲线 | 第37-38页 |
| 3.2.4 目的基因的相对定量 | 第38-39页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第39-41页 |
| 4. miRNA319和miRNA164各前体PCAMBIA2300-Actin-ocs(PXQ-act)的构建 | 第41-47页 |
| 4.1 材料与方法 | 第41-45页 |
| 4.1.1 材料 | 第41页 |
| 4.1.1.1 供试材料 | 第41页 |
| 4.1.1.2 菌株和质粒 | 第41页 |
| 4.1.1.3 主要试剂 | 第41页 |
| 4.1.1.4 PCR引物 | 第41页 |
| 4.1.2 方法 | 第41-45页 |
| 4.1.2.1 miRNA319及miRNA164过表达植物载体PCAMBIA2300-Actin-ocs(PXQ-act)的构建 | 第41页 |
| 4.1.2.2 miRNA319及miRNA164重组质粒的检测 | 第41-43页 |
| 4.1.2.3 miRNA319及miRNA164各前体重组质粒转化农杆菌EHA105 | 第43页 |
| 4.1.2.4 miRNA319及miRNA164各前体重组子转化农杆菌EHA105阳性克隆的鉴定筛选 | 第43-45页 |
| 4.2 结果分析 | 第45-46页 |
| 4.2.1 miRNA319和miRNA164各前体pXQ植物表达载体的鉴定 | 第45-46页 |
| 4.2.2 miRNA319及miRNA164各前体重组子转化农杆菌EHA105阳性克隆的鉴定筛 | 第46页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第46-47页 |
| 5. miRNA319和miRNA164各前体对水稻的遗传转化 | 第47-56页 |
| 5.1 材料与方法 | 第47-50页 |
| 5.1.1 材料 | 第47页 |
| 5.1.1.1 供试材料 | 第47页 |
| 5.1.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 5.1.2 方法 | 第47-50页 |
| 5.1.2.1 转基因植株鉴定引物的设计 | 第47页 |
| 5.1.2.2 日本晴水稻愈伤的培养 | 第47-48页 |
| 5.1.2.3 愈伤的预培养和侵染 | 第48页 |
| 5.1.2.4 筛选与分化 | 第48-49页 |
| 5.1.2.5 炼苗和移栽 | 第49页 |
| 5.1.2.6 转基因植株的鉴定 | 第49-50页 |
| 5.2 结果与分析 | 第50-54页 |
| 5.2.1 接种及继代 | 第50页 |
| 5.2.2 愈伤预培养及筛选和转基因水稻的分化、练苗及栽培 | 第50-53页 |
| 5.2.3 miRNA319及miRNA164各前体的转基因水稻的鉴定 | 第53-54页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 6. 转基因植株的表型观察及分析 | 第56-64页 |
| 6.1 材料及方法 | 第56-57页 |
| 6.1.1 材料 | 第56页 |
| 6.1.1.1 供试材料 | 第56页 |
| 6.1.1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 6.1.2 方法 | 第56-57页 |
| 6.1.2.1 转基因水稻表型观察 | 第56页 |
| 6.1.2.2 转基因水稻总RNA的提取和检测 | 第56页 |
| 6.1.2.3 cDNA的合成 | 第56页 |
| 6.1.2.4 转基因水稻靶基因的荧光定量 | 第56-57页 |
| 6.2 结果与分析 | 第57-63页 |
| 6.2.1 转基因水稻表型分析 | 第57-60页 |
| 6.2.2 水稻总RNA的检测 | 第60页 |
| 6.2.3 转基因水稻miRNA319和miRNA164靶基因表达量检测 | 第60-63页 |
| 6.3 小结与讨论 | 第63-64页 |
| 小结 | 第64-66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录一 miRNA319和miRNA164靶基因检测引物 | 第74-75页 |
| 附录二 转基因载体图谱 | 第75-76页 |
| 附录三 转基因水稻培养基配方 | 第76-78页 |
| 附录四 总RNA质量检测 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
