| 略缩语表 | 第5-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 文献回顾 | 第14-25页 |
| 第一部分 dsCARE 及其截短体的原核表达载体构建、表达及纯化 | 第25-42页 |
| 1. 材料与仪器 | 第25-27页 |
| 1.1. 菌种 | 第25页 |
| 1.2. 质粒 | 第25页 |
| 1.3. 主要仪器 | 第25-26页 |
| 1.4. 试剂及配制方法 | 第26-27页 |
| 1.4.1. 试剂与材料 | 第26页 |
| 1.4.2. 配制方法 | 第26-27页 |
| 2. 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.1. dsCAREΔRBD 和 dsCAREΔCARD 插入片段扩增 | 第27-28页 |
| 2.2. 插入片段与表达载体的连接 | 第28-31页 |
| 2.3. dsCARE、dsCAREΔRBD 和 dsCAREΔCARD 的表达 | 第31-32页 |
| 2.4. dsCARE、dsCAREΔRBD 和 dsCAREΔCARD 的纯化 | 第32-35页 |
| 3. 结果 | 第35-40页 |
| 3.1. 重组 dsCARE 截短突变体的构建 | 第35-36页 |
| 3.1.1. PCR 扩增 dsCAREΔRBD 和 dsCAREΔCARD 插入片段 | 第35-36页 |
| 3.1.2. 克隆和鉴定 | 第36页 |
| 3.2. 重组蛋白的表达 | 第36-38页 |
| 3.3. 重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 3.4. Western blot 鉴定纯化重组蛋白 | 第39页 |
| 3.5. dsCARE 冻干条件 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-42页 |
| 第二部分 dsCARE 的抗病毒作用及其机理研究 | 第42-60页 |
| 1. 材料与仪器 | 第42-44页 |
| 1.1. 细胞株 | 第42页 |
| 1.2. 病毒株 | 第42页 |
| 1.3. 主要仪器 | 第42页 |
| 1.4. 试剂及配制方法 | 第42-44页 |
| 2. 实验方法 | 第44-48页 |
| 2.1. Western blot 检测 dsCARE 进入细胞 | 第44页 |
| 2.2. poly(I:C)转染细胞 | 第44页 |
| 2.3. MTT 比色法测定 dsCARE 抑制 poly(I:C)转染细胞增殖 | 第44-45页 |
| 2.4. 病毒悬液制备 | 第45页 |
| 2.5. TCID50法测定病毒滴度 | 第45页 |
| 2.6. dsCARE 保护 ADV 感染细胞 | 第45页 |
| 2.7. dsCARE 在 ADV 剧烈感染时的作用研究 | 第45-46页 |
| 2.8. 免疫共沉淀 | 第46页 |
| 2.9. dsCARE 诱导细胞死亡机制研究 | 第46-47页 |
| 2.10. MTT 比色法测定 dsCARE 对 RSV 感染细胞的保护作用 | 第47页 |
| 2.11. 免疫荧光检测 dsCARE 对 RSV 感染细胞的保护作用 | 第47页 |
| 2.12. 台盼蓝染色法测定细胞活力 | 第47页 |
| 2.13. 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第47页 |
| 2.14. 透射电镜观察 | 第47-48页 |
| 2.15. 统计学方法 | 第48页 |
| 3. 结果 | 第48-57页 |
| 3.1. dsCARE 进入细胞并在细胞内持续存在 | 第48页 |
| 3.2. dsCARE 通过诱导凋亡的方式抑制 poly(I:C)转染的细胞增殖 | 第48-49页 |
| 3.3. dsCARE 保护细胞不受 ADV 感染 | 第49-51页 |
| 3.4. dsCARE 快速杀伤感染的细胞 | 第51-52页 |
| 3.5. dsCARE 激活 caspase 9 和 caspase 3 | 第52-53页 |
| 3.6. dsCARE 诱导的细胞死亡可能与炎症反应相关 | 第53页 |
| 3.7. dsCARE 诱导程序性坏死是抗病毒的主要机制 | 第53-54页 |
| 3.8. dsCARE 保护细胞不受 RSV 感染 | 第54-57页 |
| 3.9. 透射电镜观察 | 第57页 |
| 4. 讨论 | 第57-60页 |
| 第三部分 dsCARE 体内抗病毒作用研究 | 第60-64页 |
| 1. 材料与仪器 | 第60页 |
| 1.1. 病毒株 | 第60页 |
| 1.2. 小鼠 | 第60页 |
| 1.3. 试剂与配制方法 | 第60页 |
| 2. 实验方法 | 第60-61页 |
| 2.1. 扩增和滴定 VACV | 第60页 |
| 2.2. VACV 感染小鼠模型的建立 | 第60-61页 |
| 2.3. 分组及给药 | 第61页 |
| 2.4. 肝组织标本 | 第61页 |
| 3. 结果 | 第61-63页 |
| 3.1. 不同滴度 VACV 腹腔感染小鼠的生存期观察 | 第61-62页 |
| 3.2. dsCARE 有效预防病毒感染小鼠 | 第62页 |
| 3.3. dsCARE 减轻 VACV 感染导致的肝组织白细胞浸润 | 第62-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-64页 |
| 小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 个人简历和研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
