| 中文摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-36页 |
| 1 木质素 | 第17-25页 |
| 1.1 木质素的分布 | 第17-18页 |
| 1.2 木质素单体的生物合成途径 | 第18-22页 |
| 1.2.1 木质素单体合成途径中相关酶 | 第18-21页 |
| 1.2.2 木质素单体合成中酶的调控 | 第21-22页 |
| 1.2.3 木质素单体合成中转录因子的调控 | 第22页 |
| 1.3 总木质素含量的测定方法 | 第22-25页 |
| 1.3.1 直接法 | 第23页 |
| 1.3.2 间接法 | 第23页 |
| 1.3.3 溶解法 | 第23页 |
| 1.3.4 非破坏法 | 第23-25页 |
| 1.4 木质素与木脂素 | 第25页 |
| 2 肉桂醇脱氢酶 | 第25-28页 |
| 2.1 基因家族 | 第25-26页 |
| 2.2 基因分类 | 第26-27页 |
| 2.3 蛋白结构 | 第27-28页 |
| 2.4 基因的调控及表达分析 | 第28页 |
| 3 外源茉莉酸甲酯诱导 | 第28-29页 |
| 4 结论 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-36页 |
| 第二章 肉桂醇脱氢酶(CAD)的克隆和蛋白表达 | 第36-61页 |
| 1 前言 | 第36页 |
| 2 实验材料 | 第36-39页 |
| 2.1 菌株与载体 | 第36页 |
| 2.2 试剂及试剂盒 | 第36-37页 |
| 2.2.1 酶类 | 第36-37页 |
| 2.2.2 试剂盒 | 第37页 |
| 2.2.3 试剂 | 第37页 |
| 2.3 主要溶液和培养基 | 第37-38页 |
| 2.4 实验仪器 | 第38页 |
| 2.5 PCR引物序列 | 第38-39页 |
| 3 实验方法 | 第39-51页 |
| 3.1 PCR获取目的片段 | 第39-46页 |
| 3.1.1 序列分析 | 第39-43页 |
| 3.1.1.1 与CAD序列的比对和分析 | 第39-41页 |
| 3.1.1.2 与DFR序列的比对和分析 | 第41-42页 |
| 3.1.1.3 与CCR序列的比对和分析 | 第42-43页 |
| 3.1.2 引物设计与合成 | 第43页 |
| 3.1.3 提取质粒 | 第43-44页 |
| 3.1.4 PCR扩增目的基因 | 第44-45页 |
| 3.1.5 电泳 | 第45页 |
| 3.1.6 DNA片段回收 | 第45-46页 |
| 3.2 构建原核表达载体 | 第46-48页 |
| 3.2.1 酶切 | 第46-47页 |
| 3.2.2 连接 | 第47页 |
| 3.2.3 转化大肠杆菌 | 第47页 |
| 3.2.4 重组子鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3 蛋白表达 | 第48-51页 |
| 3.3.1 原核表达 | 第48-49页 |
| 3.3.2 蛋白的分离纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.3 蛋白的浓度测定 | 第50页 |
| 3.3.4 蛋白电泳 | 第50-51页 |
| 4 实验结果 | 第51-59页 |
| 4.1 序列分析 | 第51-56页 |
| 4.1.1 与CAD序列比对 | 第51-54页 |
| 4.1.2 与DFR序列比对 | 第54-55页 |
| 4.1.3 与CCR序列比对 | 第55-56页 |
| 4.2 PCR获取目的片段 | 第56-57页 |
| 4.3 重组子的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.4 蛋白表达 | 第58-59页 |
| 5 总结 | 第59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 第三章 肉桂醇脱氢酶(CAD)的功能鉴定和基因分析 | 第61-82页 |
| 1 前言 | 第61页 |
| 2 实验材料 | 第61-64页 |
| 2.1 植物材料 | 第61-62页 |
| 2.2 试剂及试剂盒 | 第62页 |
| 2.3 实验仪器 | 第62页 |
| 2.4 主要溶液和培养基 | 第62-64页 |
| 2.5 PCR引物序列 | 第64页 |
| 3 实验方法 | 第64-73页 |
| 3.1 底物及相关产物合成 | 第64-67页 |
| 3.1.1 合成路线 | 第64-66页 |
| 3.1.2 合成方法 | 第66-67页 |
| 3.2 体外酶活功能鉴定 | 第67-70页 |
| 3.2.1 体外酶活反应 | 第67-69页 |
| 3.2.1.1 CAD酶活反应 | 第67-68页 |
| 3.2.1.2 DFR酶活反应 | 第68-69页 |
| 3.2.1.3 CCR酶活反应 | 第69页 |
| 3.2.2 酶活产物分析 | 第69-70页 |
| 3.3 基因表达水平分析 | 第70-73页 |
| 3.3.1 木质素总含量测定 | 第70-71页 |
| 3.3.2 基因表达分析 | 第71-73页 |
| 3.3.2.1 提取RNA | 第71页 |
| 3.3.2.2 RNA反转录 | 第71-72页 |
| 3.3.2.3 实时定量PCR | 第72-73页 |
| 4 实验结果 | 第73-79页 |
| 4.1 合成化合物的波谱数据 | 第73页 |
| 4.2 体外酶活鉴定 | 第73-77页 |
| 4.2.1 CAD酶活鉴定 | 第73-74页 |
| 4.2.2 其它酶活鉴定 | 第74-77页 |
| 4.3 CAD的酶学特征 | 第77页 |
| 4.4 总体木质素含量估算和基因表达水平 | 第77-78页 |
| 4.5 茉莉酸甲酯诱导后基因表达水平 | 第78-79页 |
| 5 总结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第83-84页 |
| 附录 化合物图谱 | 第84-87页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第87页 |