| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.1 小反刍兽疫 | 第14-16页 |
| 1.1.1 小反刍兽疫概述 | 第14页 |
| 1.1.2 小反刍兽疫临床症状 | 第14页 |
| 1.1.3 流行病学 | 第14-15页 |
| 1.1.4 小反刍兽疫的诊断 | 第15页 |
| 1.1.5 小反刍兽疫预防措施 | 第15-16页 |
| 1.2 小反刍兽病毒 | 第16-18页 |
| 1.2.1 病毒形态特征 | 第16页 |
| 1.2.2 病毒的理化特征 | 第16页 |
| 1.2.3 病毒的血凝性 | 第16页 |
| 1.2.4 病毒的结构 | 第16-18页 |
| 1.3 水泡性口炎 | 第18-20页 |
| 1.3.1 水泡性口炎概述 | 第18页 |
| 1.3.2 临床症状 | 第18-19页 |
| 1.3.3 水泡性口炎的流行病学 | 第19页 |
| 1.3.4 水泡性口炎的诊断 | 第19-20页 |
| 1.3.5 防制措施 | 第20页 |
| 1.4 水泡性口炎病毒 | 第20-22页 |
| 1.4.1 水泡性口炎病毒概述 | 第20页 |
| 1.4.2 VSV的基因组结构 | 第20-21页 |
| 1.4.3 VSV N基因 | 第21-22页 |
| 1.4.4 VSV对宿主细胞的影响 | 第22页 |
| 1.5 研究目的、意义和内容 | 第22-24页 |
| 1.5.1 研究目的意义 | 第22页 |
| 1.5.2 研究方法及内容 | 第22-24页 |
| 2 小反刍兽疫N蛋白的原核表达及免疫原性分析 | 第24-35页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌毒株、载体 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂及工具酶 | 第24页 |
| 2.1.3 培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.4 溶液 | 第25页 |
| 2.1.5 仪器与设备 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 病毒RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 RT-PCR扩增目的片段 | 第26-27页 |
| 2.2.3 目的基因克隆 | 第27-29页 |
| 2.2.4 N基因的序列测定与分析 | 第29页 |
| 2.2.5 PPRV分子特征分析 | 第29页 |
| 2.2.6 重组质粒诱导表达条件的优化 | 第29页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE分析 | 第29页 |
| 2.2.8 重组目的蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.9 Western blot鉴定分析 | 第30页 |
| 2.3 结果 | 第30-34页 |
| 2.3.1 RT-PCR扩增结果 | 第30页 |
| 2.3.2 N基因序列分析结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 PPRV N蛋白二级结构分析 | 第31-32页 |
| 2.3.4 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第32页 |
| 2.3.5 诱导表达条件的优化结果 | 第32页 |
| 2.3.6 N基因的诱导表达及纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.7 N蛋白Western-Blotting免疫活性分析 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 3 小反刍兽疫N蛋白间接ELISA方法的建立 | 第35-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 主要试剂和血清 | 第35页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 抗原最佳包被度和血清最佳稀释度的确定 | 第35页 |
| 3.2.2 抗原最佳包被条件的确定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 最佳二抗工作浓度的确定 | 第36页 |
| 3.2.4 ELISA方法初步建立 | 第36页 |
| 3.2.5 ELISA临界值的确定 | 第36页 |
| 3.2.6 特异性试验 | 第36-37页 |
| 3.2.7 敏感性试验 | 第37页 |
| 3.2.8 重复性试验 | 第37页 |
| 3.2.9 对比试验 | 第37页 |
| 3.3 结果 | 第37-40页 |
| 3.3.1 最佳工作浓度 | 第37-38页 |
| 3.3.2 抗原最佳包被条件 | 第38页 |
| 3.3.3 临界值的确定 | 第38-39页 |
| 3.3.4 特异性试验 | 第39页 |
| 3.3.5 敏感性试验 | 第39页 |
| 3.3.6 重复性试验 | 第39-40页 |
| 3.3.7 对比试验 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 4 VSV-IND型和VSV-NJ型的N基因克隆及原核表达 | 第42-50页 |
| 4.1 实验材料试剂 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.2.1 基因的合成 | 第42页 |
| 4.2.2 表达引物的设计与合成 | 第42页 |
| 4.2.3 目的基因扩增及原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 4.2.4 基因序列及其同源性分析 | 第43页 |
| 4.2.5 重组质粒的诱导表达 | 第43页 |
| 4.2.6 SDS-PAGE分析 | 第43页 |
| 4.2.7 Western bolt鉴定分析 | 第43页 |
| 4.2.8 VSV N蛋白的纯化 | 第43页 |
| 4.3 结果 | 第43-48页 |
| 4.3.1 序列分析 | 第43页 |
| 4.3.2 N基因的理化性质 | 第43-44页 |
| 4.3.3 N基因酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.4 重组表达质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.5 N基因表达及蛋白纯化 | 第46-47页 |
| 4.3.6 N蛋白Western-Blotting免疫活性分析 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-49页 |
| 4.5 小结 | 第49-50页 |
| 5 VSV N基因单克隆抗体的制备和特性分析 | 第50-56页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第50页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第50页 |
| 5.1.2 仪器设备 | 第50页 |
| 5.1.3 动物和细胞株 | 第50页 |
| 5.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 5.2.1 抗原的制备 | 第50-51页 |
| 5.2.2 动物免疫 | 第51页 |
| 5.2.3 间接ELISA检测方法的建立 | 第51页 |
| 5.2.4 细胞融合与阳性克隆筛选 | 第51页 |
| 5.2.5 腹水制备及单克隆抗体纯化 | 第51-52页 |
| 5.2.6 单克隆抗体的滴度测定 | 第52页 |
| 5.2.7 间接荧光抗体试验 | 第52页 |
| 5.3 结果 | 第52-54页 |
| 5.3.1 细胞融合及筛选结果 | 第52页 |
| 5.3.2 腹水的制备及单克隆抗体纯化 | 第52-53页 |
| 5.3.3 单克隆抗体滴度 | 第53页 |
| 5.3.4 间接免疫荧光试验 | 第53-54页 |
| 5.4 讨论 | 第54-55页 |
| 5.5 小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录1 PPRV-N核苷酸及氨基酸序列 | 第65-66页 |
| 附录2 VSV-IDN-N核苷酸及氨基酸序列 | 第66-68页 |
| 附录3 VSV-NJ-N核苷酸及氨基酸序列 | 第68-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
