| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 禽流感病毒简介 | 第12-13页 |
| 1.2 禽流感病毒的流行及公共卫生学意义 | 第13页 |
| 1.3 禽流感病毒致病性的分子基础 | 第13-17页 |
| 1.3.1 HA | 第14页 |
| 1.3.2 NA | 第14-15页 |
| 1.3.3 PB2 | 第15-16页 |
| 1.3.4 PB1-F2 | 第16页 |
| 1.3.5 NS1 | 第16-17页 |
| 1.4 禽流感病毒的变异 | 第17-19页 |
| 1.4.1 禽流感病毒的变异机制 | 第17页 |
| 1.4.2 H5N1亚型禽流感病毒的变异 | 第17-18页 |
| 1.4.3 H9N2亚型禽流感病毒的变异 | 第18页 |
| 1.4.4 H7亚型禽流感病毒的变异 | 第18-19页 |
| 1.5 禽流感病毒的检测 | 第19页 |
| 1.5.1 禽流感病毒的检测方法 | 第19页 |
| 1.5.2 禽流感病毒的引物 | 第19页 |
| 1.6 反向遗传操作技术 | 第19-20页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 AIV分子诊断引物的优化 | 第21-26页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 实验用软件 | 第21页 |
| 2.1.2 实验用毒株 | 第21页 |
| 2.1.3 实验用试剂 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1 参考序列 | 第21页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.3 RT-PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.3 结果 | 第22-25页 |
| 2.3.1 鉴定引物的优化 | 第22-23页 |
| 2.3.2 HA基因扩增引物的优化 | 第23页 |
| 2.3.3 NA基因扩增引物的优化 | 第23-24页 |
| 2.3.4 内部基因扩增引物的优化 | 第24-25页 |
| 2.3.5 测序引物的优化 | 第25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 AIV分子诊断引物的应用 | 第26-55页 |
| 3.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.1 样品 | 第26页 |
| 3.1.2 实验用鸡胚 | 第26页 |
| 3.1.3 主要试剂及仪器 | 第26页 |
| 3.1.4 引物与参考序列 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26-29页 |
| 3.2.1 病毒RNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.2.2 反转录合成cDNA | 第27页 |
| 3.2.3 聚合酶链式反应（PCR）扩增病毒各节段 | 第27页 |
| 3.2.4 PCR产物的鉴定与纯化 | 第27-28页 |
| 3.2.5 各节段的核酸序列测定 | 第28-29页 |
| 3.2.6 各节段序列的拼接和进化树构建 | 第29页 |
| 3.3 结果 | 第29-53页 |
| 3.3.1 病毒分离及亚型鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3.2 HA基因的遗传演化分析 | 第30-38页 |
| 3.3.3 NA基因的遗传演化分析 | 第38-43页 |
| 3.3.4 内部基因的遗传演化分析 | 第43-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 H9N2 AIV对哺乳动物致病机理研究 | 第55-64页 |
| 4.1 材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 病毒株 | 第55页 |
| 4.1.2 SPF鸡胚及试验动物 | 第55页 |
| 4.1.3 试剂 | 第55页 |
| 4.1.4 生物安全性 | 第55页 |
| 4.1.5 引物 | 第55页 |
| 4.1.6 PBD质粒载体 | 第55-56页 |
| 4.2 方法 | 第56-58页 |
| 4.2.1 鸡胚半数感染量（EID50）测定 | 第56页 |
| 4.2.2 H9N2亚型禽流感原代病毒对BALB/c鼠的致病性试验 | 第56-57页 |
| 4.2.3 H9N2亚型禽流感病毒在BALB/c鼠体内继代感染 | 第57页 |
| 4.2.4 H9N2亚型禽流感病毒重组质粒的构建 | 第57-58页 |
| 4.2.5 H9N2亚型禽流感病毒拯救及救获病毒的鉴定 | 第58页 |
| 4.3 结果 | 第58-62页 |
| 4.3.1 同源性比较 | 第58-59页 |
| 4.3.2 H9N2 亚型禽流感病毒原代病毒对 BALB/c 鼠的致病性试验结果 | 第59-60页 |
| 4.3.3 H9N2 亚型禽流感病毒在 BALB/c 鼠体内继代感染结果 | 第60-62页 |
| 4.3.4 H9N2 亚型禽流感病毒在 BALB/c 鼠体内继代感染之后氨基酸差异 | 第62页 |
| 4.3.5 H9N2 禽流感病毒拯救及鉴定结果 | 第62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
