| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 综述 | 第12-20页 |
| 1 奶牛乳腺炎的概况 | 第12-14页 |
| 1.1 奶牛乳腺炎的发生 | 第12页 |
| 1.2 奶牛乳腺炎的症状与类型 | 第12页 |
| 1.3 奶牛乳腺炎的危害 | 第12-13页 |
| 1.4 奶牛乳腺炎的防治与治疗 | 第13页 |
| 1.5 奶牛乳腺炎的监测与诊断 | 第13-14页 |
| 2 单核苷酸多态性 | 第14页 |
| 2.1 SNP的概念 | 第14页 |
| 2.2 SNP的检测技术 | 第14页 |
| 2.3 SNP的应用 | 第14页 |
| 3 启动子 | 第14-15页 |
| 3.1 真核启动子类型 | 第15页 |
| 3.2 启动子的结构特点 | 第15页 |
| 4 miRNA | 第15-17页 |
| 4.1 miRNA的生成及加工机制 | 第16页 |
| 4.2 miRNA 的功能 | 第16-17页 |
| 5 CXCL10基因研究进展 | 第17-20页 |
| 5.1 CXCL10的结构 | 第17-18页 |
| 5.2 CXCL10的受体 | 第18页 |
| 5.3 CXCL10的表达 | 第18-19页 |
| 5.4 CXCL10基因多态性及其生物学影响 | 第19页 |
| 5.5 CXCL10基因的研究进展及研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 CXCL10基因在细胞中的表达 | 第20-27页 |
| 1 试验材料和方法 | 第20-23页 |
| 1.1 试验材料 | 第20页 |
| 1.2 主要试验设备 | 第20页 |
| 1.3 主要试验试剂 | 第20页 |
| 1.4 大肠杆菌(E coli) 和金黄色葡萄球菌(S Aureus)的培养 | 第20页 |
| 1.5 细胞培养及细菌感染 | 第20-21页 |
| 1.6 牛外周血中性粒细胞的分离 | 第21页 |
| 1.7 RNA提取和cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 1.7.1 RNA提取 | 第21页 |
| 1.7.2 cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 1.8 RT-PCR | 第22-23页 |
| 1.9 实时荧光定量PCR | 第23页 |
| 1.9.1 标准曲线制作 | 第23页 |
| 1.9.2 细胞RT-qPCR | 第23页 |
| 1.10 数据处理及分析 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-26页 |
| 2.1 各细胞中总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2 RAW 264.7 细胞中CXCL10基因mRNA的差异表达 | 第24-26页 |
| 2.3 中性粒细胞中CXCL10基因mRNA的差异表达 | 第26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 牛CXCL10基因启动子活性研究及功能SNPs分析 | 第27-39页 |
| 1 材料和方法 | 第27-33页 |
| 1.1 试验材料 | 第27页 |
| 1.2 主要试验仪器设备 | 第27页 |
| 1.3 主要试验试剂 | 第27页 |
| 1.4 DNA提取及检测 | 第27页 |
| 1.5 牛CXCL10基因生物信息学预测分析 | 第27页 |
| 1.6 牛CXCL10基因 5’侧翼序列扩增及克隆 | 第27-30页 |
| 1.6.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 1.6.2 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 1.6.3 目的片段回收纯化 | 第29页 |
| 1.6.4 双酶切及产物纯化 | 第29页 |
| 1.6.5 连接 | 第29-30页 |
| 1.6.6 转化 | 第30页 |
| 1.6.7 质粒鉴定与提取 | 第30页 |
| 1.7 瞬时转染细胞及双荧光素酶活性分析 | 第30-31页 |
| 1.7.1 293T细胞培养 | 第30页 |
| 1.7.2 293T细胞的瞬时转染 | 第30-31页 |
| 1.7.3 荧光素酶活性检测 | 第31页 |
| 1.8 SNP检测以及分型 | 第31-32页 |
| 1.8.1 SNP检测 | 第31页 |
| 1.8.2 Bi-PASA分型 | 第31-32页 |
| 1.9 数据处理及分析 | 第32-33页 |
| 1.9.1 等位基因频率和基因型频率 | 第32页 |
| 1.9.2 哈迪-温伯格定律 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-38页 |
| 2.1 牛CXCL10基因启动子生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 2.2 牛CXCL10基因核心启动子的确定 | 第34-35页 |
| 2.3 牛CXCL10基因启动子区域SNP的鉴定 | 第35-37页 |
| 2.4 SNP分型 | 第37页 |
| 2.5 牛CXCL10基因不同基因型与奶牛产奶性状的相关性分析 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 牛CXCL10基因 3’UTR靶位点SNP对bta-miR-339调控靶基因表达的影响 | 第39-48页 |
| 1 材料和方法 | 第39-42页 |
| 1.1 主要试验仪器设备 | 第39页 |
| 1.2 主要试验试剂 | 第39页 |
| 1.3 血液DNA提取及检测 | 第39页 |
| 1.4 CXCL10基因 3’UTR的SNP鉴定 | 第39页 |
| 1.5 生物信息学分析SNPs是否影响CXCL10基因的靶标miRNA | 第39页 |
| 1.6 牛CXCL10基因 3’UTR序列和miRNA扩增及克隆 | 第39-41页 |
| 1.6.1 CXCL10基因 3’UTR真核表达载体 | 第39-40页 |
| 1.6.2 mi RNA表达克隆载体构建 | 第40页 |
| 1.6.3 质粒提取与鉴定 | 第40-41页 |
| 1.7 瞬时转染细胞及荧光分析 | 第41页 |
| 1.7.1 细胞培养 | 第41页 |
| 1.7.2 293T的瞬时转染 | 第41页 |
| 1.7.3 荧光素酶活性检测 | 第41页 |
| 1.8 基因分型 | 第41-42页 |
| 1.9 不同基因型RT-PCR和RT-qPCR | 第42页 |
| 1.10 关联分析 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-47页 |
| 2.1 3’UTR序列SNP的检测及生物信息学分析 | 第42页 |
| 2.2 乳腺mi RNA芯片关于bta-miR-339簇表达量分析 | 第42-43页 |
| 2.3 双荧光素酶活性分析 | 第43-44页 |
| 2.5 SNP分型 | 第44-45页 |
| 2.6 牛CXCL10基因不同基因型与与奶牛产奶性状的相关性分析 | 第45页 |
| 2.7 核心启动子区和 3’端非翻译区单倍型组合和SCS关联性分析 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 全文结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的文章及申请的专利 | 第58页 |
