摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
第1章 前言 | 第10-15页 |
1.1 内源乙烯对植物性别表达的研究进展 | 第10-11页 |
1.2 乙烯的生物合成 | 第11-14页 |
1.2.1 ACC合成酶基因的克隆与功能研究进展 | 第11-12页 |
1.2.2 ACC合成酶基因的表达调控 | 第12-13页 |
1.2.3 ACC氧化酶基因克隆的研究进展 | 第13页 |
1.2.4 ACC氧化酶基因的表达调控 | 第13-14页 |
1.3 本研究的目的和意义 | 第14-15页 |
第2章 苎麻ACO和ACS家族部分基因的克隆和序列分析 | 第15-34页 |
2.1 试验材料、试剂与仪器 | 第15页 |
2.2 方法 | 第15-23页 |
2.2.1 苎麻组织总RNA的提取 | 第15-16页 |
2.2.2 首链cDNA的合成 | 第16-19页 |
2.2.3 RACE引物设计 | 第19-20页 |
2.2.4 PCR扩增及目的基因片段的纯化回收 | 第20-22页 |
2.2.5 PCR产物的TA克隆 | 第22页 |
2.2.6 连接产物转化大肠杆菌Trans1-T1 | 第22页 |
2.2.7 PCR筛选阳性克隆 | 第22-23页 |
2.2.8 cDNA开放读码框序列扩增 | 第23页 |
2.2.9 克隆基因的生物信息学分析 | 第23页 |
2.3 结果与分析 | 第23-32页 |
2.3.1 BnACO1、BnACO2、BnACS2全长基因的克隆 | 第23-25页 |
2.3.2 BnACO1、BnACO2、BnACS2基因的生物信息学分析 | 第25-32页 |
2.4 讨论 | 第32-34页 |
第3章 苎麻ACO1,ACO2,ACS2基因的表达特征分析 | 第34-44页 |
3.1 试验材料、试剂与仪器 | 第34页 |
3.2 方法 | 第34-36页 |
3.2.1 苎麻各组织总RNA的提取 | 第34-35页 |
3.2.2 实时荧光定量PCR引物设计 | 第35页 |
3.2.3 gDNA去除和第一链cDNA的合成 | 第35-36页 |
3.2.4 实时荧光定量PCR | 第36页 |
3.3 结果与分析 | 第36-41页 |
3.3.1 RNA提取 | 第36-37页 |
3.3.2 BnACO1基因不同部位表达差异性及胁迫诱导表达分析 | 第37-39页 |
3.3.3 BnACO1、BnACO2、BnACS2基因的时空表达分析 | 第39-41页 |
3.4 讨论与分析 | 第41-44页 |
第4章 BnACO2基因原核表达、过表达载体构建以及及转化拟南芥研究 | 第44-56页 |
4.1 试验材料、试剂与仪器 | 第44页 |
4.2 方法 | 第44-51页 |
4.2.1 原核表达载体构建 | 第44-48页 |
4.2.2 植物转基因过表达载体的构建 | 第48-49页 |
4.2.3 重组质粒转化农杆菌 | 第49-50页 |
4.2.4 转化拟南芥 | 第50页 |
4.2.5 转基因拟南芥的筛选和PCR鉴定 | 第50-51页 |
4.3 结果与分析 | 第51-54页 |
4.3.1 BnACO2基因原核表达载体的构建与重组质粒的酶切验证 | 第51-52页 |
4.3.2 BnACO2基因过表达载体的构建与重组质粒的酶切验证 | 第52-53页 |
4.3.3 转基因拟南芥的获得 | 第53-54页 |
4.3.4 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第54页 |
4.4 讨论 | 第54-56页 |
第5章 结论与展望 | 第56-58页 |
5.1 论文结论 | 第56页 |
5.2 后续研究 | 第56-58页 |
参考文献 | 第58-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
作者简介 | 第64页 |