| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1.1 小麦赤霉病危害概况 | 第12-13页 |
| 1.1.2 禾谷镰刀菌生物学性质 | 第13-15页 |
| 1.1.3 小麦赤霉病防治措施 | 第15-16页 |
| 1.1.4 小麦赤霉病菌致病机理研究 | 第16-18页 |
| 1.2 磷脂酶C(phospolipase C) | 第18-21页 |
| 1.2.1 磷脂与磷脂酶 | 第18页 |
| 1.2.2 磷脂酶C | 第18-19页 |
| 1.2.3 真菌PLC研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-30页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 酶和生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第23-25页 |
| 2.1.5 培养基配制 | 第25-27页 |
| 2.1.6 供试植株 | 第27页 |
| 2.1.7 PCR引物 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-46页 |
| 2.2.1 禾谷镰刀菌PLC基因家族结构分析 | 第30页 |
| 2.2.2 禾谷镰刀菌Fgplc基因敲除及回复 | 第30-34页 |
| 2.2.2.1 敲除载体构建过程 | 第30-34页 |
| 2.2.2.1.1 禾谷镰刀菌基因组DNA提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2.1.2 Fgplc1和Fgplc6基因敲除载体构建 | 第31-32页 |
| 2.2.2.1.3 Fgplc2、Fgplc3、Fgplc4和Fgplc5基因敲除载体构建 | 第32-34页 |
| 2.2.2.2 回复载体构建过程 | 第34页 |
| 2.2.3 禾谷镰刀菌Fgplc基因敲除 | 第34-40页 |
| 2.2.3.1 原生质体制备 | 第34-35页 |
| 2.2.3.2 原生质体的转化 | 第35页 |
| 2.2.3.3 潮霉素B筛选敲除转化子 | 第35页 |
| 2.2.3.4 PCR和RT-PCR验证敲除转化子 | 第35-36页 |
| 2.2.3.5 Southern blot验证敲除转化子 | 第36-40页 |
| 2.2.3.5.1 探针标记及检测 | 第36-37页 |
| 2.2.3.5.2 基因组DNA的准备 | 第37-38页 |
| 2.2.3.5.3 DNA变性 | 第38页 |
| 2.2.3.5.4 转膜 | 第38-39页 |
| 2.2.3.5.5 预杂交和杂交 | 第39页 |
| 2.2.3.5.6 严谨洗涤 | 第39页 |
| 2.2.3.5.7 免疫显色 | 第39-40页 |
| 2.2.4 禾谷镰刀菌Fgplc1基因回复 | 第40页 |
| 2.2.5 禾谷镰刀菌Fgplc基因敲除突变体表型分析 | 第40-46页 |
| 2.2.5.1 菌落形态观察与生长速度测定 | 第40页 |
| 2.2.5.2 菌丝末端分支观察 | 第40-41页 |
| 2.2.5.3 气生菌丝高度测定 | 第41页 |
| 2.2.5.4 菌丝疏水性测定 | 第41页 |
| 2.2.5.5 无性生殖测定 | 第41-42页 |
| 2.2.5.6 有性生殖表型测定 | 第42页 |
| 2.2.5.7 渗透胁迫敏感性测定 | 第42页 |
| 2.2.5.8 氧胁迫敏感性测定 | 第42页 |
| 2.2.5.9 细胞壁完整性测定 | 第42-43页 |
| 2.2.5.10 致病性测定 | 第43页 |
| 2.2.5.11 DON毒素产量测定 | 第43-45页 |
| 2.2.5.11.1 DON毒素的提取与测定 | 第43-44页 |
| 2.2.5.11.2 麦角甾醇的提取与测定 | 第44-45页 |
| 2.2.5.12 产毒基因表达量测定 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-64页 |
| 3.1 禾谷镰刀菌FgPLC结构分析 | 第46-47页 |
| 3.2 禾谷镰刀菌Fgplc敲除突变体的获得 | 第47-54页 |
| 3.2.1 敲除载体构建过程 | 第47-51页 |
| 3.2.1.1 Fgplc1敲除载体构建过程 | 第48页 |
| 3.2.1.2 Fgplc2敲除载体构建过程 | 第48-49页 |
| 3.2.1.3 Fgplc3敲除载体构建过程 | 第49页 |
| 3.2.1.4 Fgplc4敲除载体构建过程 | 第49-50页 |
| 3.2.1.5 Fgplc5敲除载体构建过程 | 第50页 |
| 3.2.1.6 Fgplc6敲除载体构建过程 | 第50-51页 |
| 3.2.2 敲除突变体验证 | 第51-54页 |
| 3.2.2.1 PCR验证 | 第51-52页 |
| 3.2.2.2 RT-PCR验证 | 第52-53页 |
| 3.2.2.3 Southern blot验证 | 第53-54页 |
| 3.3 禾谷镰刀菌Fgplc1回复突变体的获得 | 第54-56页 |
| 3.3.1 回复载体构建过程 | 第54-55页 |
| 3.3.2 回复突变体的验证 | 第55-56页 |
| 3.4 Fgplc调控菌落形态和菌落生长速度 | 第56-58页 |
| 3.5 Fgplc调控分生孢子形成 | 第58-59页 |
| 3.6 Fgplc调控子囊壳形成 | 第59-60页 |
| 3.7 Fgplc调控胁迫敏感性 | 第60-62页 |
| 3.8 Fgplc调控菌株致病性 | 第62-63页 |
| 3.9 Fgplc调控DON毒素生物合成 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 5 总结与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 全文总结 | 第67-68页 |
| 5.2 研究展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第79页 |
