| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 前言 | 第11页 |
| 1.2 细胞穿膜肽研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3 重组蛋白标签研究进展 | 第12-16页 |
| 1.3.1 MBP-tag | 第13页 |
| 1.3.2 GST-tag | 第13-14页 |
| 1.3.3 SUMO-tag | 第14-15页 |
| 1.3.4 TrxA-tag | 第15页 |
| 1.3.5 NusA-tag | 第15页 |
| 1.3.6 His-tag | 第15-16页 |
| 1.4 重组蛋白表达系统研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.1 原核表达系统 | 第16-17页 |
| 1.4.2 真核表达系统 | 第17-18页 |
| 1.5 蛋白纯化常用方法 | 第18-20页 |
| 1.5.1 差速离心 | 第18页 |
| 1.5.2 固定化金属离子亲和层析(IMAC) | 第18-19页 |
| 1.5.3 不同浓度饱和硫酸氨沉淀法 | 第19页 |
| 1.5.4 AKTA purifier 100纯化系统 | 第19-20页 |
| 1.6 本论文的研究背景、意义及研究内容 | 第20-23页 |
| 1.6.1 研究背景 | 第20页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第20-21页 |
| 1.6.3 研究内容 | 第21-23页 |
| 第2章 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP的原核诱导表达条件工艺优化 | 第23-32页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.4 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.4.1 质粒大提 | 第25-26页 |
| 2.4.2 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP原核诱导表达条件的摸索 | 第26-29页 |
| 2.5 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP原核诱导表达条件结果与分析 | 第29-31页 |
| 2.5.1 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP原核诱导表达正交表达结果 | 第29-31页 |
| 2.6 小结 | 第31-32页 |
| 第3章 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP的工艺纯化 | 第32-37页 |
| 3.1 前言 | 第32页 |
| 3.2 实验试剂 | 第32-33页 |
| 3.3 实验仪器 | 第33页 |
| 3.4 实验方法 | 第33-34页 |
| 3.4.1 AKTA purifier 100工艺纯化 | 第33-34页 |
| 3.4.2 蛋白浓度测定(Bradford法) | 第34页 |
| 3.4.3 蛋白样品处理 | 第34页 |
| 3.4.4 考马斯亮蓝实验分析纯度 | 第34页 |
| 3.5 实验结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.5.1 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP纯化结果(定性分析) | 第34-35页 |
| 3.5.2 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP纯化结果 | 第35-36页 |
| 3.6 小结 | 第36-37页 |
| 第4章 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP穿膜效率检测 | 第37-43页 |
| 4.1 前言 | 第37页 |
| 4.2 实验试剂 | 第37-38页 |
| 4.3 实验仪器 | 第38页 |
| 4.4 实验方法 | 第38-40页 |
| 4.4.1 细胞传代培养 | 第38页 |
| 4.4.2 细胞的复苏 | 第38-39页 |
| 4.4.3 细胞的冻存 | 第39页 |
| 4.4.4 细胞计数 | 第39-40页 |
| 4.4.5 CCK-8检测 | 第40页 |
| 4.4.6 流式细胞术检测样品处理 | 第40页 |
| 4.5 实验结果及分析 | 第40-42页 |
| 4.5.1 CCK-8检测结果 | 第40-41页 |
| 4.5.2 流式细胞检测结果 | 第41-42页 |
| 4.6 小结 | 第42-43页 |
| 第5章 细胞穿膜蛋白R_9-EGFP在小鼠体内分布研究 | 第43-47页 |
| 5.1 前言 | 第43-44页 |
| 5.2 实验试剂 | 第44页 |
| 5.3 实验仪器 | 第44页 |
| 5.4 实验方法 | 第44-45页 |
| 5.4.1 尾静脉注射 | 第44-45页 |
| 5.4.2 小鼠解剖 | 第45页 |
| 5.5 实验结果 | 第45-46页 |
| 5.6 小结 | 第46-47页 |
| 结论与展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-57页 |
| 附录A 英文缩写 | 第57-58页 |
| 附录B 常用缓冲液和试剂配方 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
