| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第15-33页 |
| 1 花衰老的机理及其调控的研究 | 第15-17页 |
| 1.1 植物衰老的机理 | 第15-17页 |
| 1.1.1 植物衰老的概念及特点 | 第15页 |
| 1.1.2 植物衰老的假说 | 第15-17页 |
| 2 花衰老的机理 | 第17-27页 |
| 2.1 花衰老的感知机制及其特异性 | 第17-19页 |
| 2.2 影响花衰老过程中的因素 | 第19-24页 |
| 2.2.1 影响花衰老的环境因素 | 第19-20页 |
| 2.2.2 影响花衰老的激素调节 | 第20-23页 |
| 2.2.3 影响花衰老的非激素调节 | 第23-24页 |
| 2.3 花衰老过程中的生理生化变化 | 第24-25页 |
| 2.3.1 细胞膜降解 | 第24页 |
| 2.3.2 蛋白质降解 | 第24-25页 |
| 2.3.3 核酸降解 | 第25页 |
| 2.4 花衰老的相关基因 | 第25-27页 |
| 3 抑制消减杂交技术 | 第27-31页 |
| 3.1 抑制消减杂交技术的原理及特点 | 第27-28页 |
| 3.2 抑制消减杂交技术在分离植物差异表达基因中的应用 | 第28-31页 |
| 4 本研究目的和意义 | 第31-32页 |
| 5 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 牡丹花衰老过程中形态、显微结构变化及衰老时期确定 | 第33-36页 |
| 1 材料与方法 | 第33-34页 |
| 1.1 试验材料 | 第33页 |
| 1.1.1 试验植物 | 第33页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第33页 |
| 1.2 方法 | 第33-34页 |
| 1.2.1 试验材料培养 | 第33页 |
| 1.2.2 花发育时期的确定 | 第33页 |
| 1.2.3 盖玻片和载玻片的处理 | 第33页 |
| 1.2.4 花瓣切片的制作和观察 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-35页 |
| 2.1 牡丹花不同发育时期的形态学变化 | 第34页 |
| 2.2 牡丹花不同发育时期的组织结构变化 | 第34-35页 |
| 3 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 牡丹花衰老相关基因的筛选及分析 | 第36-70页 |
| 1 材料与方法 | 第36-55页 |
| 1.1 试验材料 | 第36-37页 |
| 1.1.1 试验植物 | 第36页 |
| 1.1.2 菌种和质粒 | 第36页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第36页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 1.2 试验方法 | 第37-38页 |
| 1.2.1 试验材料培养 | 第37页 |
| 1.2.2 总RNA的提取 | 第37页 |
| 1.2.3 RNA的检测 | 第37-38页 |
| 1.3 抑制性消减杂交(SSH) | 第38-49页 |
| 1.3.1 cDNA第一链的合成 | 第38-39页 |
| 1.3.2 cDNA第二链的合成 | 第39-40页 |
| 1.3.3 柱层析纯化ds cDNA | 第40-41页 |
| 1.3.4 Rsa I酶切 | 第41页 |
| 1.3.5 Rsa I酶切后的cDNA纯化 | 第41-43页 |
| 1.3.6 接头连接 | 第43-44页 |
| 1.3.7 连接效率的分析 | 第44-45页 |
| 1.3.8 第一次杂交 | 第45页 |
| 1.3.9 第二次杂交 | 第45-46页 |
| 1.3.10 PCR扩增 | 第46-47页 |
| 1.3.11 消减效率分析 | 第47-48页 |
| 1.3.12 第二次PCR产物纯化 | 第48-49页 |
| 1.4 正反向消减文库的构建 | 第49-51页 |
| 1.4.1 消减的cDNA片段与pMD~(?)18-T(TaKaRa)载体连接 | 第49-50页 |
| 1.4.2 E.coli DH5α感受态的制备 | 第50页 |
| 1.4.3 连接产物的转化 | 第50-51页 |
| 1.4.4 转化重组子的筛选及鉴定 | 第51页 |
| 1.5 DNA序列测定与分析 | 第51-52页 |
| 1.6 牡丹花衰老过程中差异基因的表达模式分析 | 第52-55页 |
| 1.6.1 不同时期牡丹花瓣总RNA的提取 | 第52页 |
| 1.6.2 牡丹花衰老过程中差异基因的qRT-PCR分析 | 第52-55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-67页 |
| 2.1 RNA完整性和纯度检测 | 第55-56页 |
| 2.2 cDNA第二链的合成及纯化 | 第56-57页 |
| 2.3 Rsa Ⅰ酶切及酶切后的纯化 | 第57-58页 |
| 2.4 连接效率的分析 | 第58-59页 |
| 2.5 抑制性消减杂交后第二次PCR产物的分析 | 第59页 |
| 2.6 抑制性消减杂交消减效率的PCR分析 | 第59-61页 |
| 2.7 抑制性消减杂交cDNA文库的构建及阳性克隆的筛选 | 第61页 |
| 2.8 序列测定及分析 | 第61-67页 |
| 2.8.1 EST序列的获得 | 第61-62页 |
| 2.8.2 EST序列推测功能的分类注释和分析 | 第62-63页 |
| 2.8.3 qRT-PCR鉴定差异表达基因 | 第63-67页 |
| 3 讨论 | 第67-70页 |
| 第四章 牡丹长链脂酰辅酶A合成酶基因PsLACS的克隆及生物信息学分析 | 第70-78页 |
| 1 材料与方法 | 第70-71页 |
| 1.1 供试材料 | 第70-71页 |
| 1.2 试剂与药品 | 第71页 |
| 1.3 试验方法 | 第71页 |
| 1.3.1 总RNA的提取 | 第71页 |
| 1.3.2 PsLACS的RACE扩增 | 第71页 |
| 1.3.3 生物信息学分析 | 第71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-75页 |
| 2.1 牡丹总RNA的完整性和纯度检测 | 第72页 |
| 2.2 RACE扩增全长cDNA及序列拼接 | 第72-73页 |
| 2.3 PsLACS蛋白理化性质分析 | 第73-74页 |
| 2.4 PsLACS磷酸化位点预测 | 第74页 |
| 2.5 PsLACS蛋白信号肽和跨膜结构域分析 | 第74-75页 |
| 2.6 PsLACS蛋白二级结构和结构域分析 | 第75页 |
| 2.7 PsLACS的同源性比较 | 第75页 |
| 3 讨论 | 第75-78页 |
| 第五章 牡丹PsPIP2基因的克隆及其蛋白结构预测 | 第78-85页 |
| 1 材料与方法 | 第78-79页 |
| 1.1 供试材料 | 第78页 |
| 1.2 试剂与药品 | 第78-79页 |
| 1.3 试验方法 | 第79页 |
| 1.3.1 总RNA的提取 | 第79页 |
| 1.3.2 RACE-ready CDNA的制备 | 第79页 |
| 1.3.3 PsPIP2的RACE扩增 | 第79页 |
| 1.3.4 生物信息学分析 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-83页 |
| 2.1 牡丹总RNA的提取 | 第79-80页 |
| 2.2 RACE扩增PsPIP2全长cDNA及序列拼接 | 第80页 |
| 2.3 PsPIP2蛋白理化性质分析 | 第80页 |
| 2.4 PsPIP2磷酸化位点预测 | 第80-81页 |
| 2.5 PsPIP2蛋白信号肽和跨膜结构域分析 | 第81-82页 |
| 2.6 PsPIP2蛋白二级结构和结构域分析 | 第82页 |
| 2.7 PsPIP2的同源性比较 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 第六章 牡丹花衰老相关基因PsMADS4的功能分析 | 第85-103页 |
| 1 材料与方法 | 第85-93页 |
| 1.1 试验材料 | 第85页 |
| 1.1.1 试验植物 | 第85页 |
| 1.1.2 载体和菌种 | 第85页 |
| 1.1.3 试验试剂 | 第85页 |
| 1.2 试验方法 | 第85-93页 |
| 1.2.1 总RNA的提取及检测 | 第85-86页 |
| 1.2.2 PsMADS4基因全长的cDNA扩增 | 第86-89页 |
| 1.2.3 PsMADS4编码的蛋白质的生物信息学分析 | 第89页 |
| 1.2.4 PsMADS4表达载体的构建 | 第89-91页 |
| 1.2.5 pBI121-PsMADS4重组子转化农杆菌感受态EHA105 | 第91-92页 |
| 1.2.6 含有PsMADS4-pBI121重组子的农杆菌侵染拟南芥 | 第92-93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-101页 |
| 2.1 PsMADS4基因全长cDNA的扩增 | 第93页 |
| 2.2 PsMADS4编码的蛋白质的生物信息学分析 | 第93-98页 |
| 2.2.1 PsMADS4的蛋白质理化性质分析 | 第93-94页 |
| 2.2.2 PsMADS4的磷酸化位点预测 | 第94-95页 |
| 2.2.3 PsMADS4的蛋白信号肽和跨膜结构域分析 | 第95页 |
| 2.2.4 PsMADS4蛋白二级结构和保守结构域分析 | 第95-96页 |
| 2.2.5 PsMADS4蛋白序列的同源性比对与系统进化树分析 | 第96-98页 |
| 2.3 PsMADS4表达载体的构建 | 第98-99页 |
| 2.3.1 PsMADS4 ORF的PCR扩增 | 第98页 |
| 2.3.2 PsMADS4超表达载体的鉴定 | 第98-99页 |
| 2.4 PsMADS4转基因植株的获得 | 第99-100页 |
| 2.4.1 PsMADS4转基因植株的筛选 | 第99页 |
| 2.4.2 PsMADS4转基因植株的RT-PCR鉴定 | 第99-100页 |
| 2.5 PsMADS4转基因植株的表型分析 | 第100-101页 |
| 3 讨论 | 第101-103页 |
| 主要结论 | 第103页 |
| 创新点 | 第103页 |
| 下一步计划 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-119页 |
| 附录 | 第119-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 作者简介 | 第128-129页 |
