| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 基因组文库 | 第11页 |
| 1.2 克隆载体 | 第11-12页 |
| 1.3 克隆载体的发展 | 第12-16页 |
| 1.3.1 λ 噬菌体载体 | 第13页 |
| 1.3.2 Cosmid载体 | 第13-14页 |
| 1.3.3 YAC载体 | 第14-15页 |
| 1.3.4 BAC载体 | 第15页 |
| 1.3.5 PAC载体 | 第15-16页 |
| 1.3.6 BIBAC载体及TAC载体 | 第16页 |
| 1.4 BAC载体的发展 | 第16-20页 |
| 1.4.1 BAC载体pBAC108L | 第16-17页 |
| 1.4.2 BAC载体pBeloBAC11 | 第17-18页 |
| 1.4.3 BAC载体pBACe 3.6 | 第18-19页 |
| 1.4.4 BAC载体pCUGIBAC1 | 第19页 |
| 1.4.5 BAC载体pHZAUBAC1 | 第19-20页 |
| 1.4.6 其它BAC载体 | 第20页 |
| 1.5 BAC载体的应用 | 第20-21页 |
| 1.6 BAC克隆末端测序与shotgun文库测序 | 第21-23页 |
| 1.7 茶树简介 | 第23-24页 |
| 1.7.1 茶树分布 | 第23页 |
| 1.7.2 茶树分类 | 第23页 |
| 1.7.3 茶树的经济价值 | 第23-24页 |
| 1.7.4 茶树研究进展 | 第24页 |
| 1.8 本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 材料 | 第25页 |
| 2.2 实验仪器 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-40页 |
| 2.3.1 BAC载体制备 | 第25-28页 |
| 2.3.2 茶树BAC文库构建 | 第28-33页 |
| 2.3.3 BAC文库鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.4 BAC文库的复制 | 第34页 |
| 2.3.5 BAC文库的基因筛选 | 第34-36页 |
| 2.3.6 茶树BAC克隆shotgun测序文库的构建 | 第36-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-55页 |
| 3.1 BAC载体制备 | 第40-42页 |
| 3.2 茶树BAC文库构建 | 第42-46页 |
| 3.2.1 高分子量DNA制备 | 第42页 |
| 3.2.2 部分酶切 | 第42-43页 |
| 3.2.3 大量酶切（一次筛选） | 第43-44页 |
| 3.2.4 DNA片段的第二次筛选 | 第44页 |
| 3.2.5 电洗脱与洗脱产物浓度检测 | 第44-45页 |
| 3.2.6 连接、脱盐、预转化与预转化检测 | 第45页 |
| 3.2.7 大量转化、克隆挑拣 | 第45-46页 |
| 3.3 BAC文库鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.1 BAC文库插入片段、空载率以及覆盖度 | 第46-47页 |
| 3.3.2 BAC文库细胞器污染率的估测 | 第47页 |
| 3.4 BAC文库基因筛选 | 第47-50页 |
| 3.4.1 一级混合池构建与PCR筛选 | 第47-49页 |
| 3.4.2 二级混合池构建与PCR筛选 | 第49-50页 |
| 3.5 茶树BAC克隆shotgun测序文库的构建 | 第50-55页 |
| 3.5.1 BAC DNA插入片段大小的检测 | 第50-51页 |
| 3.5.2 BAC DNA的提取与超声波随机打断效果 | 第51-52页 |
| 3.5.3 回收DNA的平端修复 | 第52-53页 |
| 3.5.4 目标DNA与载体的连接与转化 | 第53页 |
| 3.5.5 BAC克隆shotgun文库插入片段的检测 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| 4.1 BAC载体制备 | 第55页 |
| 4.2 茶树BAC文库构建 | 第55-57页 |
| 4.2.1 高分子量DNA的制备 | 第55-56页 |
| 4.2.2 部分酶切 | 第56页 |
| 4.2.3 大量酶切（第一次片段筛选）与第二次筛选 | 第56页 |
| 4.2.4 电洗脱与洗脱产物浓度检测 | 第56页 |
| 4.2.5 DNA片段与载体连接 | 第56-57页 |
| 4.2.6 脱盐、预转化、检测 | 第57页 |
| 4.3 BAC文库鉴定 | 第57页 |
| 4.4 BAC文库基因筛选 | 第57-58页 |
| 4.5 茶树BAC克隆shotgun测序文库的构建 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 附录1 实验部分试剂配方 | 第69-71页 |
| 1.1 冰冻培养基 | 第69页 |
| 1.2 碱裂解P1，P2，P3溶液（制备质粒） | 第69-71页 |
| 附录二 小量手工提取BAC质粒步骤 | 第71-72页 |
| 附录三 基因筛选引物信息及PCR反应体系 | 第72-74页 |
| 3.1 引物信息 | 第72页 |
| 3.2 引物的退火温度和扩增片段大小 | 第72页 |
| 3.3 PCR筛选体系及参数 | 第72-74页 |
| 附录四 基因筛选序列比对 | 第74-81页 |
| 4.1 Csi092H17基因筛选序列比对 | 第74-75页 |
| 4.2 Csi020O15基因筛选序列比对 | 第75-76页 |
| 4.3 Csi044B12基因筛选序列比对 | 第76-77页 |
| 4.4 Csi274K14基因筛选序列比对 | 第77-78页 |
| 4.5 Csi271P8基因筛选序列比对 | 第78-79页 |
| 4.6 Csi106D7基因筛选序列比对 | 第79-80页 |
| 4.7 Csi047O18基因筛选序列比对 | 第80-81页 |
| 附录五 96孔板提BAC质粒 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
